廣州碩譜生物科技有限公司固相萃取柱批發(fā)

正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動相極性的分離模式。

常見的極性固定相有：硅膠，氧化鋁，弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相模式下，溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強度也逐漸增大。廣州碩譜生物科技有限公司固相萃取柱批發(fā)溶劑環(huán)境的pH怎么影響化合物在小柱上的保留，為什么我們要關(guān)注化合物的pKa值，在C18小柱中需要考慮這些因素嗎。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)物。

為何 SPE小柱操作強調(diào)流速？

SPE小柱填料充填壓實后，形成柱床，當(dāng)溶劑流過小柱時，速度過快會產(chǎn)生兩個問題：一是對粘結(jié)相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤舒展，從而使其保持活性降低；二是流速過快會使小柱形成溝槽，使其未充分浸潤，從而降低吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標(biāo)物質(zhì)的傳質(zhì)過程，從而降低回收率。當(dāng)柱流速度為0.5-3.0 mL/min時，通常不會產(chǎn)生溝槽效應(yīng)，且溝槽的形成與柱床高度有關(guān)；當(dāng)柱流速度為0-3.0 mL/min時，由于橫截面積較大，柱床較低，溝槽效應(yīng)較小，因而適用于高流速條件下的大體積水樣的富集；當(dāng)離子交換和特定吸附作用時，填料和分析靶物的作用時間較長，控制流速可保證良好的保留效果。離子交換固相萃取適用于可解離成帶電離子的化合物，其機理是利用帶電荷的目標(biāo)化合物離子與帶相反電荷的吸附劑之間的靜電吸引力。

保留雜質(zhì)這種凈化模式多用于食品或農(nóng)殘的檢測，下面舉個例子：

食品中丙1烯酰胺的檢測，樣品經(jīng)提后，凈化；

SPE柱：月旭Welchrom? C18E 500 mg/6mL；

活化：5mL甲1醇，5mL水；

上樣：待凈化液，收集；

洗脫：2mL30%甲1醇分次潤洗燒瓶，再上樣，收集，抽干；

合并上樣液和洗脫液，并用30%甲1醇水定容至5mL，并過0.22 μm濾膜，上HPLC檢測。

當(dāng)我們使用硅膠鍵合填料型色譜柱時，基于色譜知識，了解到硅膠鍵合填料一般廠商推薦的 pH值范圍是2-8，那么對于使用硅膠鍵合填料的固相萃取小柱，是否有必要嚴(yán)格遵守這一規(guī)定？

我們需要了解廠家推薦的pH2-8耐受范圍，是為了保證色譜柱的正常使用壽命，硅膠鍵合相在耐受范圍之外使用時，會導(dǎo)致鍵合相與硅膠基質(zhì)發(fā)生斷裂，從而破壞色譜柱的效力和保持其特性，但我們知道， pH耐受范圍以外的溶劑對色譜柱的影響，主要是一個累積的過程，在這種溶劑的作用下，色譜柱的性能會發(fā)生變化，從而使色譜柱的性能發(fā)生變化，產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的變化，壽命縮短。5，中性氧化鋁主要通過鋁原子中心與帶有高負(fù)電荷的雜原子作用，如：N、O、P、S及富電子的芳香族化合物。SPE小柱和色譜柱之間的一個區(qū)別是， SPE是一次性消耗品，在耐受溶劑范圍之外，短時間的溶劑洗滌對小柱的保留特性幾乎沒有影響，而且不會造成保留的顯著差異，因此它使用的 pH值范圍較寬，一般可在 pH值范圍1-10之間使用，而不會造成結(jié)果的差異。

常見反相鍵合硅膠吸附劑的類型

C2柱

C2柱的官能團是乙1基( ethyl)。其主要作用力是非極性、極性，第二作用力是陽離子交換。通常，根據(jù)待測化合物和填料之間作用力的不同，SPE柱的填料大致分為幾個類型，離子交換、HLB（脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮）、C18、硅膠、弗羅里硅土、中性氧化鋁等，而作用力大致包括離子鍵、氫鍵和范德華力。因為C2的碳鏈?zhǔn)侄?，使得硅膠上的硅羥基(Si-OH)較為暴露在吸附劑表面，從而導(dǎo)致C2具有相當(dāng)顯著的極性特點。在實際應(yīng)用中，如果目標(biāo)物在C8或C18上吸附作用太強，可用C2來取代。C2的極性作用力比CN的略強。

什么是SPE柱SPE柱是在分析前處理中，用于凈化樣品的一種色譜耗材，由于樣品處理液中經(jīng)常會有大量的雜質(zhì)（樣品基質(zhì)），因此對分析結(jié)果可能會造成較大的影響，因此針對待測化合物的特性，選擇適當(dāng)?shù)腟PE柱能有效凈化樣品中的雜質(zhì)。

SPE柱的類型

SPE柱的凈化原理是根據(jù)待測化合物和雜質(zhì)在柱中填料的保留能力差異，起到分離的作用，這也是色譜的重要原理之一。

通常，根據(jù)待測化合物和填料之間作用力的不同，SPE柱的填料大致分為幾個類型，離子交換、HLB（脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮）、C18、硅膠、弗羅里硅土、中性氧化鋁等，而作用力大致包括離子鍵、氫鍵和范德華力。另外，一般實驗室常用的真空方法，會遇到很多實際問題，如：過濾速度不均、粘稠液體不通過，個別樣品可能還需要手工輔助處理，造成分析方法的變異較大。根據(jù)不同的作用力，SPE可選擇吸附待測化合物或者雜質(zhì)。

固相萃?。⊿PE）技術(shù)是目前十分常見的樣品前處理方法，廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、生物樣品等諸多領(lǐng)域的檢測。在規(guī)格種類繁多的固相萃取柱（SPE小柱）中，聚乙烯吡咯烷酮基質(zhì)SPE(如常見的HLB小柱)占有重要一席。

這類基質(zhì)具有良好的水可浸潤性和化學(xué)穩(wěn)定性，表面同時具有親水性和疏水性官能團，從而對各類極性、非極性化合物具有均衡的吸附作用。其吸附能力大，樣品容量高，對大部分有機物的吸附容量增大，回收率也更高，且在吸附后有機物容易被定量洗脫。

固相萃取柱的預(yù)處理

在萃取樣品之前，吸附劑必須經(jīng)過適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，一足為了潤濕和活化固相萃取填料，以使目標(biāo)萃取物與固相表面緊密接觸，易于發(fā)生分子間相互作用；二是為了除去填料中可能存在的雜質(zhì)．減少污染。采取的方法是用一定量溶劑沖洗萃取柱。

反相類型的固相萃取硅膠和非極性吸附劑介質(zhì)，通常用水溶性有機1溶劑如甲1醇預(yù)處理，甲1醇潤濕吸附劑表面和滲透鍵臺烷1基相，便于水更有效地潤濕硅膠表面。然后用水或緩沖溶液替換滯留在柱中的甲1醇，以使樣品水溶液與吸附劑表面有良好的接觸，提高萃取效率。針對這個問題，月旭推出了離子交換固相萃取硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)小柱。正相類型的固相萃取硅膠和極性吸附劑介質(zhì)，通常用樣品所在的有機1溶劑來預(yù)處理。離子交換填料一般用3—5ml。去離子水或低濃度的離子緩沖溶液來預(yù)處理。