ELISA 是一種結(jié)合抗原、抗ti特異性反應和酶對底物高xiao催化作用的高敏感性免yi學實驗技術。相對于傳統(tǒng)芯片而言，RNA-Seq無需預先設計探針，即可對物種的細胞類型的轉(zhuǎn)錄組進行檢測，能夠提供較的數(shù)字化信號，更高的檢測通量以及更廣泛的檢測范圍，是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復雜性的良好工具。ELISA 的基礎是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗ti仍保持其免yi學活性，酶標記的抗原或抗ti既保留其免yi學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復合物與液體中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標記的抗原或抗ti，通過反應使其結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶含量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

miRNA測序

microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發(fā)夾結(jié)構的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（雙鏈）但是和siRNA密切相關。PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100ul進行抽提反應混合液,以除去石蠟油。microRNA通過和靶基因mRNA堿基配對引導沉默復合體（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻譯，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達（新發(fā)現(xiàn)miRNA也能在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達）。miRNA在物種進化中相當保守，在動物、植物和真菌等中發(fā)現(xiàn)的miRNA表達均有嚴格的組織特異性和時序性。miRNA在細胞生長和發(fā)育過程中起多種作用，包括調(diào)控發(fā)育、分化、凋亡和增殖等。

目前研究miRNA的方法主要是realtime-PCR、生物芯片技術以及第二代測序技術。染色質(zhì)免l疫共沉淀技術(ChIP)基于體內(nèi)分析而發(fā)展的染色質(zhì)免l疫沉淀分析Chromatinimmunoprecipitationassaykit,ChIP)技術可以真實、完整地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白?；诘诙鷾y序技術的miRNA測序，可以一次獲得數(shù)百萬條miRNA序列，能夠快速鑒定出不同組織、不同發(fā)育階段、不同疾病狀態(tài)下已知和未知的miRNA及其表達差異，為研究miRNA對細胞進程的作用及其生物學影響提供了有力工具。

RNA提取處理的步驟如下：

在玻璃燒杯中注入去離子水，加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%（DEPC-H2O）。（DEPC二焦碳酸酯為活性很強的物，須在通風櫥中小心使用）

將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中，注入DEPC-H2O，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中，在通風柜中37℃ 或室溫下處理過夜。

將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中，將裝有DEPC- H2O 處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口，高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。

滅菌塑料制品烘烤干燥，置潔凈處備用。

玻璃和金屬物品250 ℃烘烤3小時以上。

3.引物的OD數(shù)如何定量？

答：引物合成引物OD數(shù)是這樣測定的：用紫外分光光度計，波長260nm，石英比色杯，光程為1厘米，測定溶液的光密度。凝膠掃描及圖像分析(1)圖像掃描：凝膠染色后采用Imagescanner以300dpi，16-bit模式（65536灰階）進行掃描。測定時溶液的光密度好稀釋到0.2-1.0之間。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后，用1ml水稀釋測OD值。需要根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出母液的OD值。

4.需要什么級別的引物？

答：引物常用的純化方式脫鹽、BioRP / OPC純化、PAGE純化、HPLC純化。根據(jù)實驗需要，確定訂購引物的純度級別。