低溫生物菌種處理的優(yōu)勢

我國北方污水處理一直受到低溫影響，尤其氨氮處理效果差、出水難以達(dá)標(biāo)等問題的困擾。目前污水廠一般采用增加污泥濃度、水力停留時間、池體保溫加蓋等措施以提高處理效果，但投資和運行費用增加的問題也隨之而來。溫度降低所導(dǎo)致的生物處理效果下降，歸根結(jié)底是由于當(dāng)水溫低于15℃時，處生化系統(tǒng)中存在的低溫微生物的數(shù)量和活性不能達(dá)到常溫下中溫菌的水平，污水中的有機(jī)污染物質(zhì)不能被迅速降解所導(dǎo)致的。因此，采用投加耐低溫生物菌劑的方式對東北地區(qū)污水處理廠生化處理系統(tǒng)的耐低溫菌種改良，對低溫快速啟動和污水處理廠污水穩(wěn)定達(dá)標(biāo)排放意義重大。

低溫生物菌種的改良制備

即采用遺傳育種的方法，使菌株(從自然界分離篩選而得的出發(fā)菌株)的遺傳因子 DNA發(fā)生突變、重組，從而從中選出產(chǎn)量高、成品質(zhì)量好或具有新的培養(yǎng)特性如耐產(chǎn)物抑制、能利用廉價原料以及具有生產(chǎn)新品種能力的優(yōu)良菌種。采用的方法有誘變育種、雜交育種、細(xì)胞融合技術(shù)和重組DNA技術(shù)。誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷-60、乙烯類等物理或化學(xué)誘變劑處理生產(chǎn)菌株的單孢子懸浮液，以獲得誘發(fā)突變株。隨后進(jìn)行突變株的篩選，從中篩選高產(chǎn)菌株。由于隨機(jī)的突變?nèi)后w中，有益突變所占比例很低，要獲得高產(chǎn)突變株必須進(jìn)行大量篩選?？筛鶕?jù)生物合成途徑中的反應(yīng)點,并通過它們的改變以提高產(chǎn)率或其他特性，如選育抗產(chǎn)物反饋抑制的突變株、增加細(xì)胞透性的突變株及營養(yǎng)缺陷型的突變株等。這種"理性篩選法"廣泛應(yīng)用于氨基酸產(chǎn)生菌的選育。

低溫生物菌種的孢子分離法

( 1 )褶上涂抹法:選取新鮮、健壯、未開傘、的子實體，洗凈后用0 75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)馬林熏蒸消毒12 ~ 24 小時，再按無菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，然后置于25 ~ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 )孢子印采集法:取滅過菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開傘或未開裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時后，便落下孢子，形成印痕(即孢子印)。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 )孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤，直徑25 厘米左右，盤內(nèi)先墊襯4~6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時。

低溫生物菌種的傳代次數(shù)

由于微生物存在著自發(fā)突變，而突變都是在繁殖過程中發(fā)生而表現(xiàn)出來的。所以應(yīng)盡量避免不必要的移種和傳代，把必要的傳代降低到低水平，以降低自發(fā)突發(fā)的機(jī)率。菌種傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生突變的幾率就越高，因而菌種發(fā)生退化的機(jī)會就越多。這要求不論在實驗室還是在生產(chǎn)實踐上，必須嚴(yán)格控制菌種的移種傳代次數(shù)，并根據(jù)菌種保藏方法的不同，確立恰當(dāng)?shù)囊品N傳代的時間間隔。如同時采用斜面保藏和其它的保藏方式(真空凍干保藏、砂土管、液氮保藏等)，以延長菌種保藏時間。