廣州碩譜生物科技有限公司，反相SPE柱，是目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)SPE小柱較好的生產(chǎn)廠家。氧化鋁SPE柱批發(fā)

為了有效地利用離子交換機(jī)理在 SPE柱中吸附目標(biāo)化合物，需要滿(mǎn)足兩個(gè)條件：

目標(biāo)化合物中的離子與吸附劑基團(tuán)中的離子態(tài)帶相反電荷；

(2)萃取環(huán)境中的 pH必須使目標(biāo)化合物和吸附物上的功能基團(tuán)同時(shí)帶電；

(3)萃取環(huán)境中不得含有高濃度的競(jìng)爭(zhēng)化合物，其電荷與目標(biāo)化合物相同。

實(shí)踐中，為了滿(mǎn)足前兩個(gè)條件，以保證99%以上的目標(biāo)化合物和固相萃取吸附劑表面的官能團(tuán)可以是離子化或中性化狀態(tài)，樣品或 SPE柱的 pH應(yīng)根據(jù)目標(biāo)化合物和固相萃取吸附劑表面官能團(tuán)的 pKa值來(lái)調(diào)整。

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反相層析技術(shù)目前在 HPLC中應(yīng)用zui為廣泛，主要是因?yàn)樗m用于分析絕大多數(shù)非極性物質(zhì)，以及大量可離子化的離子化合物。

反相層析包括什么？除了一些常見(jiàn)的固定相C18,C8,C4,C2,C1, CN,NH2和 Phenyl之外，還存在一些分支類(lèi)型，如混合相固定相(如苯i基-己基)，填充類(lèi)型，在封尾和未封尾中極性?xún)?nèi)嵌固定方式等。在反相色譜中也使用了許多其他的填料，包括聚合物、聚合型硅膠和聚合型氧化鋁、無(wú)機(jī)-有機(jī)雜化物、涂層氧化鋯和石墨化碳等。這些固定相各有其優(yōu)缺點(diǎn)。色譜柱受污染時(shí)，與未受污染的色譜柱有一定區(qū)別。反相色譜柱受到污染會(huì)產(chǎn)生反壓?jiǎn)栴}，必須進(jìn)行清洗和再生以恢復(fù)或接近原始狀態(tài)。

(在使用這些清潔溶劑之前，可與柱子供應(yīng)商協(xié)商，以確保它們不會(huì)對(duì)填料造成損害。硅樹(shù)脂基質(zhì)中的柱狀物一般都可以用，但是某些洗滌溶劑的配方可能導(dǎo)致有機(jī)聚合物基質(zhì)的填充物膨脹或收縮，從而影響其色譜特性。)此外，確保上表所用的清潔溶劑與以前使用的溶劑可互溶，丙i醇可作為良好的過(guò)渡。每一個(gè)溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20個(gè)液柱體積。因?yàn)槟承┤軇┫到y(tǒng)粘度較大，應(yīng)相應(yīng)調(diào)整沖洗流速，以確保不超過(guò)泵的壓力。在用完胍或脲等溶劑清洗過(guò)的柱子上，至少要用40~50柱體積的 HPLC級(jí)純水進(jìn)行沖洗。對(duì)反相柱來(lái)說(shuō)，不推薦使用十二烷基磺酸鈉(SDS)和 Trition等表面活性劑，因?yàn)檫@些化合物一定會(huì)牢固地吸附到硅膠結(jié)合相柱上，因此難以去除。使用表面活性劑可以改變填料的表面性能。但是， SeparationGroup的研究表明：多肽合成過(guò)程中產(chǎn)生的保護(hù)基和清除劑對(duì)柱體的污染，可通過(guò)向流動(dòng)相中加入500μ L1% SDS溶液，以1 ml/min的速度清除。以5%~95% EBN/1%(v/v)的三i氟乙i酸梯度洗脫后，在平衡起始條件下，柱體的多肽分離功能得以恢復(fù)。

在反相-固相萃取模式中，溶劑體系的極性應(yīng)按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞減，而溶劑體系的洗脫強(qiáng)度應(yīng)逐漸增加。要確保所選的樣本溶劑不會(huì)洗脫目標(biāo)化合物，所選的淋洗劑應(yīng)在不洗脫目標(biāo)化合物的前提下，zui大限度地洗脫干擾物，所選的洗脫劑應(yīng)能恰巧完全洗脫目標(biāo)化合物。在許多固相萃取材料的極性表面和樣品中目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)之間會(huì)產(chǎn)生極性力。通常使用極性力的吸附劑在色譜中被稱(chēng)為正相色譜吸附劑。極性力比非極性力更強(qiáng)，但比離子力更弱。常用的極性基團(tuán)有羥基，胺基，巰基等。

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在填充壓實(shí)后， SPE小柱的填料形成柱床，當(dāng)溶劑流過(guò)小柱時(shí)，速度過(guò)快會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)問(wèn)題：一是對(duì)粘結(jié)相填料而言，由于流速過(guò)快，使其不能充分浸潤(rùn)舒展，從而導(dǎo)致其保留活性降低；二是過(guò)快的流速會(huì)使小柱形成溝槽，使小柱沒(méi)有充分浸潤(rùn)，從而減少吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標(biāo)物質(zhì)的傳質(zhì)過(guò)程，從而降低回收率。

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當(dāng) SPE小柱填料裝實(shí)后，流速過(guò)小柱時(shí)，液體是以層流通過(guò)填料層，將填料層充分浸潤(rùn)，潤(rùn)濕的液面截層向上推進(jìn)，見(jiàn)附圖；流速過(guò)大時(shí)，柱床厚度過(guò)大時(shí)，可能在填料內(nèi)形成溝道，液流將穿過(guò)溝道，快速通過(guò)小柱，而使填料浸潤(rùn)不足，從而使得體與填料的接觸面積大大減小，嚴(yán)重影響填料對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的保留性。

凈化方式的 SPE常用于吸附雜質(zhì)，富集方式常用于吸附目標(biāo)物質(zhì)， GCB是一種石墨化碳黑，是在惰性氣氛下將炭黑加熱至2700-3000℃烘焙而成，它由六個(gè)碳原子組成平面六角形，層疊而成，對(duì)于芳香平面分子易于嵌入，且吸附能力強(qiáng)，對(duì)芳香化合物具有較強(qiáng)的選擇性，對(duì)其它分析物具有較好的吸附性能，但 GCB的吸附和解吸性能會(huì)直接影響到填料的使用范圍，對(duì) GCB的吸附能力較強(qiáng)，但對(duì) GCB的吸附能力稍差，需要選擇適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑來(lái)釋放所吸附的物質(zhì)，因此，解析溶劑的匹配比較困難，由于其對(duì)色素等的優(yōu)異吸附性能，因此在農(nóng)殘樣品處理中，常用于吸附色素等雜質(zhì)，而不是用于吸附目標(biāo)化合物。

凈化方式的 SPE常用于吸附雜質(zhì)，富集方式常用于吸附目標(biāo)物質(zhì)， GCB是一種石墨化碳黑，是在惰性氣氛下將炭黑加熱至2700-3000℃烘焙而成，它由六個(gè)碳原子組成平面六角形，層疊而成，對(duì)于芳香平面分子易于嵌入，且吸附能力強(qiáng)，對(duì)芳香化合物具有較強(qiáng)的選擇性。

有一些項(xiàng)目，當(dāng)淋洗步驟完成后，直接用一定量的洗脫液，如1 ml洗脫，這個(gè)過(guò)程將洗脫和定容集進(jìn)行一步處理，前一步處理必然會(huì)影響洗脫步驟的定量結(jié)果。

就是溶劑互溶問(wèn)題，當(dāng)淋洗過(guò)程中使用的溶劑極性與洗脫溶劑的極性相差很大時(shí)，就會(huì)產(chǎn)化分層，洗脫阻力大，洗脫液有被稀釋的危險(xiǎn)等，從而導(dǎo)致洗脫效果不同，從而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果失敗。

我們需要知道廠家推薦的pH2-8耐受范圍，是為了保證色譜柱的正常使用壽命，硅膠鍵合相在耐受范圍之外使用，會(huì)導(dǎo)致鍵合相與硅膠基質(zhì)發(fā)生斷裂，從而破壞色譜柱的效率并保持其特性，但我們知道，超過(guò)耐受范圍 pH值范圍以外的溶劑對(duì)色譜柱的影響，主要是一個(gè)積累的過(guò)程，在溶劑的作用下，逐漸溶解，導(dǎo)致色譜柱的性能發(fā)生變化且不可逆，壽命縮短。