【廣告】
按照PQR三原則法進(jìn)行評價(jià)。P指的是Purity(純度),具體而言就是磁珠提取后的核酸中含有多少非核酸類的雜質(zhì)殘留,如蛋白、鹽、多糖等。該指標(biāo)通常用吸光度比值(A260/A280和A260/A230)來衡量。
Q指的是Quality(質(zhì)量),磁珠提取后的核酸尤其是較長的基因組核酸應(yīng)保持其完整性,不應(yīng)出現(xiàn)斷裂或降解等現(xiàn)象。該指標(biāo)可通過簡單的凝膠電泳或者復(fù)雜一些的特定PCR及微流控芯片(如Agilent Bioanalyzer)進(jìn)行評估。
R指的是Recovery(收率),磁珠提取過程應(yīng)當(dāng)盡量將所有的核酸都能從樣本中提取出來。高收率對于核酸檢測尤其是疾病早期檢測的靈敏度至關(guān)重要,在疾病早期,樣本中的病原體核酸含量通常較低,如果不能地提取到所有核酸,那么很容易出現(xiàn)假陰性,導(dǎo)致漏檢。
固定化酶是通過物理的或化學(xué)的方法,將酶分子束縛在載體上,使其既保持酶的天然活性,又便于與反應(yīng)液分離,可以重復(fù)使用,它是酶制劑中的一種新劑型。運(yùn)用磁性高分子微球作為結(jié)合酶的載體,具有以下優(yōu)點(diǎn):有利于固定化酶從反應(yīng)體系中分離和回收,操作簡便。對于雙酶反應(yīng)體系,當(dāng)一種酶的失活較快時(shí),就可以用磁性材料來固載另一種酶,回收后反復(fù)使用,降低成本;磁性載體固載酶放入磁場穩(wěn)定的流動床反應(yīng)器中,可以減少持續(xù)反應(yīng)體系中的操作,適合于大規(guī)模連續(xù)化操作;利用外部磁場可以控制磁性材料固定化酶的運(yùn)動方式和方向,替代傳統(tǒng)的機(jī)械攪拌方式,提高固定化酶的催化效率。
磁性微球能與蛋白質(zhì)產(chǎn)生表面吸附作用,具有一定的相容性,它能使蛋白質(zhì)純化而又不改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),并且磁性微球純化蛋白質(zhì)不受溫度的影響,但是隨著時(shí)間的延長、pH值的升高,吸附量會有所降低。
細(xì)胞分離與標(biāo)記:利用磁性微球進(jìn)行細(xì)胞分離的一般過程是,將抗細(xì)胞表面特異性包被磁球表面,與細(xì)胞原液混合孵育、磁分離,然后用適當(dāng)方法解離,并將磁球分離出來,得到純凈的細(xì)胞。磁性微球在應(yīng)用于細(xì)胞分離時(shí),通過選擇表面特異性的不同,既可以用于分離不需要的細(xì)胞,也可用于富集所需要的細(xì)胞。
微球已研究多年,但是目前已上市的僅有緩釋微球,靶向微球還處于研發(fā)階段。微球制劑技術(shù)的關(guān)鍵仍是靶向性,只有從根本上解決靶向性問題,才能解決藥致命的毒副作用。靶向微球制劑的研發(fā),以及靶向性的體內(nèi)外評價(jià)方法仍然是今后研究的熱點(diǎn)。而針對已上市緩釋微球產(chǎn)品而言,很多微球的關(guān)鍵質(zhì)量屬性并沒有體現(xiàn)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中,這就要求在微球的質(zhì)量研究中,一方面要建立準(zhǔn)確可行的實(shí)驗(yàn)方法來對微球制劑關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行控制,另一方面,要研究這些關(guān)鍵質(zhì)量屬性與質(zhì)量的內(nèi)在聯(lián)系,從而建立合理規(guī)范的限度要求。例如微球的粒度分布與釋放度有密切聯(lián)系,粒度分布能指征體外釋放度,因此建立合理有效的粒度分布限度范圍可以作為對釋放度控制的一個(gè)重要補(bǔ)充。