PCR實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)設(shè)置

要完成一組PCR實(shí)驗(yàn)，通常需要經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析4個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。

這4個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)用房應(yīng)相鄰布置，組成一個(gè)獨(dú)立的PCR實(shí)驗(yàn)區(qū)。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)區(qū)包括:試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。

PCR實(shí)驗(yàn)室整體平面布局某醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局如圖1所示，整個(gè)區(qū)域有一個(gè)公用走廊，每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)有專(zhuān)門(mén)的緩沖區(qū)。通過(guò)壓差控制，使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染，并且降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。

試劑準(zhǔn)備區(qū)該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。

試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

試劑準(zhǔn)備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計(jì)算冷負(fù)荷時(shí)，需要將它們計(jì)算在內(nèi)。

房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)正壓狀態(tài)，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染。

標(biāo)本制備區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。

標(biāo)本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計(jì)算冷負(fù)荷時(shí)，需要將它們計(jì)算在內(nèi)。在標(biāo)本制備區(qū)，還需要配備生物安全柜，用于進(jìn)行提取核酸的操作。

PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)PCR實(shí)驗(yàn)室如何分區(qū)？應(yīng)該分3區(qū)還是4區(qū)呢？

標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室可分成4個(gè)區(qū)域，按操作流程包括：

1）

試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝、保存。

2）

樣本制備區(qū)：樣本分裝，核酸提取、保存。

3）

核酸擴(kuò)增區(qū)：提取純化的核酸上機(jī)擴(kuò)增。

4）

產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果分析，生成報(bào)告。

隨著核酸檢測(cè)方法的優(yōu)化和實(shí)驗(yàn)儀器的功能強(qiáng)化，PCR實(shí)驗(yàn)走向了自動(dòng)化和高通量，這大大降低了病毒檢測(cè)的時(shí)間、提高了檢測(cè)的效率，也改變了普通PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的平面布局。如全自動(dòng)定量PCR實(shí)驗(yàn)室可設(shè)置為試劑制備區(qū)、樣本處理區(qū)、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)，后兩個(gè)區(qū)合并（用于新冠病毒檢測(cè)的PCR實(shí)驗(yàn)室）。一體化自動(dòng)化PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置試劑制備和自動(dòng)檢測(cè)區(qū)，后三個(gè)區(qū)合并