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不計空白梯度洗脫…為保證良好的重復(fù)性，梯度洗脫的溶劑純度要求較高。由于弱溶劑中的雜質(zhì)在色譜柱上被強溶劑洗脫，在分析樣品之前，必須對樣品進行空白梯度洗脫，識別溶劑雜質(zhì)峰。分級洗脫溶劑需要完全脫氣，以防止在混合過程中產(chǎn)生氣泡。沒有注意到溶劑混合引起的粘度變化…由于混合溶劑的粘度隨組分而變化，因此，在梯度洗脫過程中常常會發(fā)生壓力變化。比如，和水的粘度都比較小，當(dāng)它們以相似比例混合時，粘度增加很大，這時的柱壓比或水為流動相時大一倍。所以在梯度洗脫時要注意防止壓力超過輸液泵或色譜柱可以承受的大壓力。

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六通閥的正確使用與維修：①樣品進樣前，要用0.45μ的濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。②旋轉(zhuǎn)閥芯時不要太慢，不要停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力急劇上升，甚至超過了泵的大壓力；再轉(zhuǎn)到進樣位置，過高的壓力會使柱頭損壞。③為了防止進樣閥內(nèi)的緩沖鹽及樣品殘留，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進樣閥。一般可采用清水沖洗，或先用溶樣溶劑沖洗，再用清水沖洗。色譜柱的使用與維護色譜柱的正確使用與維護非常重要，一不小心就會降低柱效，縮短使用壽命，甚至損壞。為了維護色譜柱，在進行色譜分析時，必須注意以下問題。

HPLC (HPLC)作為一種、快速的分析分離技術(shù)，在上個世紀(jì)70年代得到迅速發(fā)展，是現(xiàn)代分離檢測的重要手段。層析法的分離原理是：當(dāng)溶解于流動相(mobile phase)的各組分通過固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)，其大小、強弱不同，在固定相中的滯留時間也不同，從而先后從固定相中流出。也叫色層法，色譜法。

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HPLC法適用范圍很廣，樣品適用范圍廣，不受分析對象的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有化合物都包括高沸點、極性、離子型及大分子等，都可以用 HPLC分析測定，從而彌補了氣相色譜法的不足?，F(xiàn)有已知有機化合物中20%左右可用的氣相色譜分析方法，而80%需要 HPLC分析。液相色譜由于其分離、分析速度快、檢測靈敏度高、可分析分離高沸點、不氣化、熱不穩(wěn)定等生理活性物質(zhì)等特點，已在藥典中得到了廣泛的應(yīng)用，并已在藥典中廣泛應(yīng)用。HPLC分析方法不受溫度和樣品沸點的限制，因而具有廣泛的應(yīng)用前景。HPLC技術(shù)經(jīng)過30多年的快速發(fā)展，在基礎(chǔ)理論、儀器設(shè)備、色譜柱等方面的研究日趨成熟，目前已成為化學(xué)化工、環(huán)境、藥學(xué)、食品等領(lǐng)域具優(yōu)勢的分離分析方法之一。

根據(jù)分離機制的不同，液相色譜可以分為：水相固吸附色譜水液分布色譜法水離子交換色譜——離子對色譜分子量排阻色譜(或凝膠滲透色譜)I)固吸附色譜流體為液體，固定相為固體吸附劑，物質(zhì)按吸附量的不同而進行分離。㈡液-液分配色譜法移動相和固定相都是液體的色譜法，即液-液色譜，是利用樣品組分在兩種不相溶的液相之間的分布進行分離。一個液相是一個流動相，另一個是在載體上施加固定相。流相極性小于固定相極性的液-液色譜方法稱為正相分配色譜。流相極性大于固定相極性的液-液色譜稱為反相分配色譜。㈢離子交換色譜法㈣離子對色譜法。

分子排阻色譜法移動相就像人體的血液一樣，其質(zhì)量直接影響著整個系統(tǒng)的正常運行。應(yīng)采用 HPLC級溶劑，溶劑之間不可混溶，不可直接更換！異作為過渡溶劑，通常在換溶劑時，水相和與其不溶于水。留意溶劑的截止波長。截斷波長是指這種溶劑在紫外檢測器中使用的低波長，在低于此波長時，溶劑會有強烈的紫外吸收，從而影響極限的穩(wěn)定性，干擾對被分析物質(zhì)的檢測。HPLC所用的水必須是新鮮的，并經(jīng)過0.45微米的濾膜過濾。推薦每天換新鮮水。長時間不使用時，要用替換使用水管道，防止霉變。保持色譜柱和系統(tǒng)，使用完儀器后，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑吹确椒āＨ粢镁彌_鹽，首先要把鹽洗干凈。如果儀器長時間不使用，建議封存純。由于傾向于生成聚合物。推薦封存、/水或/水。如果發(fā)生流路堵塞，可試著反接后進行沖洗。藻類在被污染的溶劑或溶劑瓶中生長，會縮短溶劑過濾器的壽命，并影響泵及系統(tǒng)的性能。水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4-7)尤其如此。