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等溫核酸試劑盒
普通的提取實驗用國產(chǎn)的試劑盒就足以,價格不高,基本上各地均有現(xiàn)貨,如天根(目前國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種)等,其價格比進口試劑盒要便宜許多,且效果還不錯,還可以。
當然,就RNA的提取而言,不一定試劑盒的提取效果就非常好,其實采用一些經(jīng)典的RNA提取方法,效果也很不錯,如:TRIZOL、EDTA等,只是試劑盒使用方便,經(jīng)典的方法操作復雜一些。
核酸試劑盒的原理
核酸檢測,其實就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否有病毒核酸?,F(xiàn)在核酸檢測試劑盒(多重熒光RT-PCR法),能夠?qū)崿F(xiàn)一小時快速診斷。
根據(jù)銳科技發(fā)布的文章《如何進行核酸檢測帶你揭秘全過程》,目前的病毒核酸檢測試劑盒,多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測原理是以病毒的基因序列為檢測靶標,通過PCR擴增,使我們的選擇這段靶標DNA序列指數(shù)級增加,每一個擴增出來的DNA序列,都可與我們預先加入的一段熒光標記探針結(jié)合,產(chǎn)生熒光信號,擴增出來的靶基因越多,累計的熒光信號就越強。
與假陰性相對的是假陽性。這通常是由于樣本被污染或是核酸檢測試劑盒被污染導致的?!叭鄙賴栏窨刂茥l件的實驗室環(huán)境、不的檢測操作,以及樣本本身的污染,都會導致假陽性出現(xiàn)。”有人告訴記者,“由于事發(fā)突然,很多地方可能沒有檢測條件,因此需要把樣本送到符合條件的實驗室去,而運輸途中也有污染風險。”此外,檢測試劑盒的探針引物或酶受到污染之后,也會出現(xiàn)假陽性。
近年來,等溫擴增方法的發(fā)展讓基因檢測得以擺脫熱循環(huán)儀器的使用,因此更加便捷化?;诘葴財U增方法,多種具有POCT潛力的SARS-CoV-2檢測技術(shù)得以開發(fā)出來。特別是結(jié)合CRISPR技術(shù)后,檢測的特異性和靈敏度得到了進一步提升。盡管如此,幾乎所有這些報道的技術(shù)僅僅證明了其在單基因檢測中的應用。然而,臨床認可的金標準方法,如RT-qPCR,通常需要檢測兩個基因。因為雙基因檢測能夠有效地避免因基因部分降解,基因拷貝數(shù)差異和擴增錯誤等引起的潛在假陰性結(jié)果。