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反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團與目標化合物碳氫鍵之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質中提取分離出非極性和中等極性的目標化合物。對利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標化合物,可用氯i仿、環(huán)i己烷、乙i酸乙i酯等具有非極性的溶劑洗脫。當溶劑的洗脫強度足夠大,可以使目標化合物與吸附劑非極性基團間的范德華力不受影響時,使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強的甲i醇,對許多化合物而言,也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候,單種溶劑無法完全洗脫疏水性的目標化合物,可以考慮使用二氯甲i烷:乙i酸乙i酯(1:1,體積比)。
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對典型的硅膠基質鍵合反相柱體,在不使用緩沖液的情況下,建議采用下列清洗溶劑系列:甲i醇---乙晴---75%乙晴/25%異丙i醇---異丙i醇---二氯甲i烷---己烷;每種溶劑至少沖洗10個柱體,分析柱的洗滌流速為250 mm×4.6 mm。zui終以10柱體積異丙i醇過渡,然后返回到原始流動相(不含緩沖鹽),zui后返回到初始流動相配置。如使用紫外檢測器,則應避免選擇在紫外區(qū)域有吸收作用的溶劑,否則需要使用大量的溶劑沖洗基線,以使基線穩(wěn)定。四氫呋i喃也是常用的清潔溶劑。如懷疑柱子受到嚴重污染,也可用二甲亞砜(DMSO)或二甲i基胺與水按50:50的比例混合,用流速低于0.5 ml/min的水沖洗色譜柱。
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在填充壓實后, SPE小柱的填料形成柱床,當溶劑流過小柱時,速度過快會產(chǎn)生兩個問題:一是對粘結相填料而言,由于流速過快,使其不能充分浸潤舒展,從而導致其保留活性降低;二是過快的流速會使小柱形成溝槽,使小柱沒有充分浸潤,從而減少吸附填料與樣品的接觸面積,影響目標物質的傳質過程,從而降低回收率。
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當柱流速度為0-3.0 mL/min時,由于橫截面積較大,柱床較低,溝槽效應較小,因而適用于高流速條件下的大體積水樣的富集;當離子交換和特定吸附作用時,填料和分析靶物的作用時間較長。
在離子交換小柱中,保持目標物質的離子化而不是分子態(tài)是關鍵,而在離子交換小柱的交換機理中,則與其實驗結果直接相關。對硅膠鍵合C18小柱的萃取,由于硅膠(SiOH)不能完全“封口”,當 pH大于4.0時,硅膠都會帶負電,從而使能電離的化合物與硅膠發(fā)生作用,加強了這一次個作用理(主要作用力是非極性相互作用力),使這類物質對硅膠-C18的保持力增強。
防爆柱結構:
管柱:一種吸附劑載體,由級聚制成,一般呈形狀。有些制造商還提供玻璃柱用于特殊分析(例如 PAEs分析)。圓柱管端部出口尺寸已標準化,可用于不同廠家固相萃取多管真空裝置。
篩選板:對吸附液和過濾液進行固定。聚乙烯是一種常用的篩板材料,對其進行特殊分析還可以采用特氟隆,不銹鋼片或玻璃等材料。
吸附劑:固體萃取柱中起分離作用的物質。早些時候還廣泛用于柱色譜的Al2O3、 florisil、石墨化炭黑等吸附劑,現(xiàn)在仍然在固相萃取過程中使用;現(xiàn)在常見的吸附劑是由各種球形硅膠顆粒鍵合官能團制得的硅膠吸附劑;上世紀后期發(fā)明的有機聚合物吸附劑,如聚二乙烯基苯-N-乙烯吡咯烷酮,已在許多應用中取代了硅膠鍵合吸附劑。
輔助設備:儲樣器,增加柱管上的容器體積,提高單次上樣量;適配器,將柱管和柱管、柱管和儲樣器連接起來。