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不計(jì)空白梯度洗脫…為保證良好的重復(fù)性，梯度洗脫的溶劑純度要求較高。由于弱溶劑中的雜質(zhì)在色譜柱上被強(qiáng)溶劑洗脫，在分析樣品之前，必須對(duì)樣品進(jìn)行空白梯度洗脫，識(shí)別溶劑雜質(zhì)峰。分級(jí)洗脫溶劑需要完全脫氣，以防止在混合過(guò)程中產(chǎn)生氣泡。沒(méi)有注意到溶劑混合引起的粘度變化…由于混合溶劑的粘度隨組分而變化，因此，在梯度洗脫過(guò)程中常常會(huì)發(fā)生壓力變化。比如，和水的粘度都比較小，當(dāng)它們以相似比例混合時(shí)，粘度增加很大，這時(shí)的柱壓比或水為流動(dòng)相時(shí)大一倍。所以在梯度洗脫時(shí)要注意防止壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱可以承受的大壓力。

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六通閥的正確使用與維修：①樣品進(jìn)樣前，要用0.45μ的濾膜過(guò)濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。②旋轉(zhuǎn)閥芯時(shí)不要太慢，不要停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力急劇上升，甚至超過(guò)了泵的大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位置，過(guò)高的壓力會(huì)使柱頭損壞。③為了防止進(jìn)樣閥內(nèi)的緩沖鹽及樣品殘留，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。一般可采用清水沖洗，或先用溶樣溶劑沖洗，再用清水沖洗。色譜柱的使用與維護(hù)色譜柱的正確使用與維護(hù)非常重要，一不小心就會(huì)降低柱效，縮短使用壽命，甚至損壞。為了維護(hù)色譜柱，在進(jìn)行色譜分析時(shí)，必須注意以下問(wèn)題。

HPLC (HPLC)作為一種、快速的分析分離技術(shù)，在上個(gè)世紀(jì)70年代得到迅速發(fā)展，是現(xiàn)代分離檢測(cè)的重要手段。層析法的分離原理是：當(dāng)溶解于流動(dòng)相(mobile phase)的各組分通過(guò)固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)，其大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中的滯留時(shí)間也不同，從而先后從固定相中流出。也叫色層法，色譜法。

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HPLC法適用范圍很廣，樣品適用范圍廣，不受分析對(duì)象的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有化合物都包括高沸點(diǎn)、極性、離子型及大分子等，都可以用 HPLC分析測(cè)定，從而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。現(xiàn)有已知有機(jī)化合物中20%左右可用的氣相色譜分析方法，而80%需要 HPLC分析。液相色譜由于其分離、分析速度快、檢測(cè)靈敏度高、可分析分離高沸點(diǎn)、不氣化、熱不穩(wěn)定等生理活性物質(zhì)等特點(diǎn)，已在藥典中得到了廣泛的應(yīng)用，并已在藥典中廣泛應(yīng)用。HPLC分析方法不受溫度和樣品沸點(diǎn)的限制，因而具有廣泛的應(yīng)用前景。HPLC技術(shù)經(jīng)過(guò)30多年的快速發(fā)展，在基礎(chǔ)理論、儀器設(shè)備、色譜柱等方面的研究日趨成熟，目前已成為化學(xué)化工、環(huán)境、藥學(xué)、食品等領(lǐng)域具優(yōu)勢(shì)的分離分析方法之一。

根據(jù)分離機(jī)制的不同，液相色譜可以分為：水相固吸附色譜水液分布色譜法水離子交換色譜——離子對(duì)色譜分子量排阻色譜(或凝膠滲透色譜)I)固吸附色譜流體為液體，固定相為固體吸附劑，物質(zhì)按吸附量的不同而進(jìn)行分離。㈡液-液分配色譜法移動(dòng)相和固定相都是液體的色譜法，即液-液色譜，是利用樣品組分在兩種不相溶的液相之間的分布進(jìn)行分離。一個(gè)液相是一個(gè)流動(dòng)相，另一個(gè)是在載體上施加固定相。流相極性小于固定相極性的液-液色譜方法稱為正相分配色譜。流相極性大于固定相極性的液-液色譜稱為反相分配色譜。㈢離子交換色譜法㈣離子對(duì)色譜法。

分子排阻色譜法移動(dòng)相就像人體的血液一樣，其質(zhì)量直接影響著整個(gè)系統(tǒng)的正常運(yùn)行。應(yīng)采用 HPLC級(jí)溶劑，溶劑之間不可混溶，不可直接更換！異作為過(guò)渡溶劑，通常在換溶劑時(shí)，水相和與其不溶于水。留意溶劑的截止波長(zhǎng)。截?cái)嗖ㄩL(zhǎng)是指這種溶劑在紫外檢測(cè)器中使用的低波長(zhǎng)，在低于此波長(zhǎng)時(shí)，溶劑會(huì)有強(qiáng)烈的紫外吸收，從而影響極限的穩(wěn)定性，干擾對(duì)被分析物質(zhì)的檢測(cè)。HPLC所用的水必須是新鮮的，并經(jīng)過(guò)0.45微米的濾膜過(guò)濾。推薦每天換新鮮水。長(zhǎng)時(shí)間不使用時(shí)，要用替換使用水管道，防止霉變。保持色譜柱和系統(tǒng)，使用完儀器后，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑吹确椒?。若要用緩沖鹽，首先要把鹽洗干凈。如果儀器長(zhǎng)時(shí)間不使用，建議封存純。由于傾向于生成聚合物。推薦封存、/水或/水。如果發(fā)生流路堵塞，可試著反接后進(jìn)行沖洗。藻類在被污染的溶劑或溶劑瓶中生長(zhǎng)，會(huì)縮短溶劑過(guò)濾器的壽命，并影響泵及系統(tǒng)的性能。水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4-7)尤其如此。