大鼠脂肪的分離

 將手術(shù)切取的大鼠脂肪組織盡量剪碎后移至離心管，其余步驟與人脂肪的分離一致。

 經(jīng)手術(shù)切除獲得的大鼠皮下脂肪組織消化后原代培養(yǎng)24 h，細胞分化，且肉眼觀察會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶底部貼附著一層網(wǎng)狀薄膜，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶可使這層網(wǎng)狀薄膜從瓶壁上脫落，鏡下觀 察發(fā)現(xiàn)大部分細胞都附著于這層膜上，通過術(shù)獲取的人脂肪組織消化后則無此現(xiàn)象。增加膠原酶的量和消化時間也無法避免，取材時的或脂肪間結(jié)締組織未被完全消化，細胞，穿過細胞篩進入了培養(yǎng)瓶并沉淀于瓶底部形成的。膠原蛋白酶雖然可以特異性水解膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)，但不會損傷其他蛋白質(zhì)。處理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 消化5 min。然后利用40 μm的細胞篩過濾后傳代。 根據(jù)作者的經(jīng)驗，每毫升手術(shù)切除的大鼠脂肪可分離基質(zhì)血管成分細胞約1.81×106個。原代培養(yǎng)2.24×10^7個大鼠基質(zhì)血管成分細胞，40 h后傳代時約剩余 6.2×10^6個細胞，細胞剩余率27%。

細胞培養(yǎng)中常見的污染及解決方法

真菌污染

真菌污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細絲可以在顯微鏡下觀察到。，一些真菌類似于死細胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，比較容易區(qū)分。此外，它們會慢慢長出細細的黑色細絲，因為它們生長得比較慢，不像細菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。

解決方法：一旦被真菌污染，果斷丟棄，然后對細胞房、CO2 培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進行消毒。

細胞實驗介紹——細胞運動能力檢測：

細胞劃痕實驗是體外模擬細胞遷移能力和修復(fù)能力快捷的檢測方法。在長滿的細胞培養(yǎng)板或者培養(yǎng)皿中，沿著中線使用移液器頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線，去除中線的細胞，流式細胞檢測結(jié)果分析，細胞在0h、12h、24h后，觀察細胞往中線遷移情況，判斷細胞遷移能力。

一般流程：細胞接種培養(yǎng)-劃痕-不同時間點拍照

細胞遷移和侵襲實驗是體外模擬細胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中，將細胞接種于小室中，利用培養(yǎng)液成分的差異誘導(dǎo)細胞運動，檢測細胞的遷移和侵襲能力的差異。

一般流程：transwell小室準備-細胞接種-細胞培養(yǎng)-transwell小室染色-顯微鏡拍照

結(jié)果示例：

                                       圖 A 細胞劃痕實驗圖；B，C 細胞遷移和侵襲實驗圖

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