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6. 八臂迷宮實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌詫m臂的數(shù)目可不同,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)課題外包,包括8、16、24、32、40和48臂迷宮。迷宮臂越少要求動(dòng)物記住探究過(guò)的臂也越小,動(dòng)物的行為操作就越簡(jiǎn)單。增加臂的數(shù)目一方面增加了對(duì)動(dòng)物空間記憶的要求,另一方面也引入了更多的、有必要考慮的干擾因素(例如過(guò)去的迷宮學(xué)習(xí)對(duì)目前所測(cè)記憶的影響)。所以,通常使用8臂迷宮,動(dòng)物模型構(gòu)建公司,既可減少不必要的、過(guò)多臂的干擾,動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)外包,又可縮短訓(xùn)練和測(cè)試所花的時(shí)間。
7. 所用食物通常為小塊的、帶巧克力味(動(dòng)物喜歡的味道之一)或甜味的早餐圈(每塊10mg);也可用液體食物(如巧克力奶或水)。后者對(duì)于測(cè)試某些影響動(dòng)物對(duì)固體食物吞咽的尤為實(shí)用。
8. 影響動(dòng)物迷宮操作主要有兩大因素:對(duì)迷宮或觀察者的恐懼與動(dòng)物探究習(xí)性和已知放在迷宮臂內(nèi)食物的驅(qū)使??謶忠蛩剡^(guò)強(qiáng)會(huì)阻止動(dòng)物的迷宮操作,使動(dòng)物始終停留在迷宮的某一個(gè)地方而不去探究。缺乏對(duì)食物的渴求也會(huì)產(chǎn)生類似結(jié)果,增加對(duì)動(dòng)物的撫摸,必要時(shí)加高迷宮臂的側(cè)墻,有助于減少動(dòng)物的恐懼。如食物的驅(qū)使作用不足,可減少食物量,但必須同時(shí)監(jiān)測(cè)體重和一般身體狀況。通常大鼠體重不應(yīng)低于禁食前的80%;對(duì)多數(shù)大鼠,體重降低15%即可。
9. 與水迷宮不同,臂迷宮適合反復(fù)測(cè)試或長(zhǎng)期記憶的測(cè)試。一般認(rèn)為,工作記憶代表短期記憶,參考記憶代表長(zhǎng)期記憶。
敲低效果驗(yàn)證方法:
RT-PCR
檢測(cè)mRNA,是否仍存在靶 mRNA?或是否敲低成功?
這種方法非常靈敏,但無(wú)法準(zhǔn)確預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)水平。
蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)
使用抗ti來(lái)檢測(cè)樣品中的靶蛋白表達(dá)以及多種相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá),從而觀察靶蛋白敲除對(duì)其它蛋白質(zhì)的影響。
免yi細(xì)胞化學(xué)法
可檢測(cè)是否存在敲低蛋白。
其優(yōu)勢(shì)在于利用雙重染色法,可同時(shí)檢查敲除對(duì)其它蛋白質(zhì)表達(dá)的影響以及其它蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的位置。
實(shí)驗(yàn)原理
高架十字迷宮(the elevated plus maze,EPM)是評(píng)價(jià)嚙齒類動(dòng)物焦躁反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法 , 相較傷害性刺激所致小鼠焦躁行為檢測(cè)(如電刺激 、 噪聲刺激 、 飲食剝奪和暴露在捕食者氣味等), 該實(shí)驗(yàn)具有操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn) ,延安動(dòng)物模型, 能直觀反映小鼠的條件應(yīng)答 。 EPM實(shí)驗(yàn)是在高架Y型迷宮的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的 。 EPM由開臂(open arms和閉臂(closed arms)各兩條組成 , 呈十字形交叉 , 交義部分為中央?yún)^(qū) , 距地面有一定高度 。其原理是由于面對(duì)新事物開臂 小鼠會(huì)產(chǎn)生好奇心去探究 , 而它們有嗜暗的天性(閉臂), 兩者之間發(fā)生探究與回避的沖突行為,產(chǎn)生焦躁心理。整個(gè)迷宮距離地面的高度相當(dāng)于人類站在懸崖邊,易導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)生恐懼不安的心理??梢酝ㄟ^(guò)對(duì)比小鼠在開臂和閉臂內(nèi)的滯留時(shí)間和路程來(lái)評(píng)價(jià)小鼠的焦躁行為。
EPM實(shí)驗(yàn)在藥品開發(fā)和研究中得到廣泛的應(yīng)用:主要用于苯二氮卓類藥品的抗焦躁作用研究 及篩選具有抗焦l慮作用的新藥,也被用于研究精神性藥品濫用的影響及激s素的功能,應(yīng)激對(duì)生殖、衰老、妊s娠的影響等。抗焦l慮藥主要選擇性地抑制邊緣系統(tǒng) 的海馬、杏仁核 ,產(chǎn)生抗焦躁作用。
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