山西PCR實驗室工程相關(guān)內(nèi)容

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核酸檢測PCR實驗室建設(shè)要點：通常PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求，需根據(jù)實驗內(nèi)容確定實驗室潔凈度。當PCR實驗樣品需要保護時，實驗室應(yīng)設(shè)潔凈空調(diào)系統(tǒng)。對于2019-nCoV核酸檢測實驗室，建議設(shè)置10萬級凈化。

氣流組織宜采用上送下排，送風(fēng)口和排風(fēng)口布置應(yīng)使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到較小程度。在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點的上方附件不得設(shè)送風(fēng)口過濾器排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室內(nèi)被污染風(fēng)險高的區(qū)域，單向布置，不得有障礙；不能以回（排）風(fēng)夾墻代替排風(fēng)直管，排風(fēng)過濾裝置與排風(fēng)總管的連接必須全部是實體風(fēng)管。

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PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備：試劑準備區(qū)：主要進行試劑的制備，分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)域。

樣品制備區(qū)：主要進行樣品的保存，核酸提取，山西PCR實驗室通風(fēng)工程，貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。 本區(qū)主要設(shè)備有冰箱，生物安全柜，離心機，加樣器，振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染，壓力一般設(shè)計為 10Pa。

擴增區(qū)：主要進行DNA擴增項目。已制備的DNA模板(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設(shè)備有：冰箱，加樣器，離心機，擴增儀等。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶從本區(qū)漏出，壓力一般設(shè)計為-25Pa。

擴增產(chǎn)物分析區(qū)：主要進行擴增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有加樣器，、和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域，壓力一般設(shè)計為-25Pa。

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PCR實驗室為什么要進行三區(qū)隔離？

PCR反應(yīng)過程中不斷進行升溫降溫，液體蒸發(fā)又冷凝，PCR管中部分空氣形成氣溶膠，攜帶大量的DNA擴增產(chǎn)物(注意，1ng擴增產(chǎn)物中可作為模板的DNA片段數(shù)量，超過1ng起始模板中可擴增DNA片段數(shù)量的幾百萬倍甚至更高。比如人的基因組DNA有30億個bp，要擴增的單拷貝基因片段是300bp，1ng起始模板中可以作為模板DNA片段只占總起始模板DNA總量的千萬分之一)。如果在實驗室打開含PCR擴增產(chǎn)物的管蓋，大量攜帶DNA擴增產(chǎn)物的氣溶膠就會涌出，擴散到空氣中，從而對環(huán)境造成污染。

雖然在整個空間環(huán)境中DNA的含量很低，但由于理論上只要有1個可做為模板的DNA片段也能PCR擴增成功，這就是為什么在污染環(huán)境中陰性對照也能擴增出條帶的原因。所以在PCR實驗室(比如臨床PCR檢驗實驗室)，通常有四區(qū)隔離(或至少是三區(qū)隔離)的要求。

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