含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物(mixed culture)。如果在一個菌落中所有細(xì)胞均來自于一個親代細(xì)胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)(pureculture)。在進(jìn)行junzhong鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化，方法有許多種。

1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物。

2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃guadao把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落。

3、平板劃線法

zui簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、fangshe法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，后在所劃的線上分散著單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個細(xì)胞長成一個菌落。

4、澆混接種

該法是將待接的微生物先放入培養(yǎng)皿中，然后再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達(dá)到稀釋的目的。待平板凝固之后，置合適溫度下培養(yǎng)，就可長出單個的微生物菌落。

5、涂布接種

與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落。

6、液體接種

從固體培養(yǎng)基中將菌洗下，倒入液體培養(yǎng)基中，或者從液體培養(yǎng)物中，用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中，或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中，都可稱為液體接種。

7、注射接種

該法是用注射的方法將待接的微生物轉(zhuǎn)接至活的生物體內(nèi)，如人或其它動物中，常見的yimiao預(yù)防接種，就是用注射接種，接入人體，來預(yù)防某些疾病。

8、huoti接種

huoti接種是專門用于培養(yǎng)病毒或其它病原微生物的一種方法，因?yàn)椴《颈仨毥臃N于活的生物體內(nèi)才能生長繁殖。所用的huoti可以是整個動物；也可以是某個離體活組織，例如猴等；也可以是發(fā)育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養(yǎng)。

注：有所接種必須無菌操作

培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具(如接種針和吸管等)在無菌條件下接種含菌材料(如樣品、菌苔或菌懸液等)于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無菌操作。

(1)接種滅菌 (2)開啟棉塞 (3)管口滅菌 (4)挑起菌苔 (5)接種 (6)塞好棉塞。

培養(yǎng)基適用性檢查

微生物計(jì)數(shù)用的商品化的預(yù)制培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。

學(xué)習(xí)：類似于無菌檢查法，此處將“成品培養(yǎng)基”修改為“商品化的預(yù)制培養(yǎng)基”，表述，下文還有，不再贅述。

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

供試液制備

根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45°C。供試液從制備至加人檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，微生物檢測中心，不得超過1小時。

學(xué)習(xí)：此處應(yīng)注意同時進(jìn)行數(shù)個品種計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)時的時效問題。“供試液制備”這一節(jié)，水溶性供試品、水不溶性非油脂供試品、油脂類供試品的制備方法無變化。在2020版藥典中，將原“(4)需用特殊方法制備供試液的供試品”中的小類（四種）提升至與上述3類并列表述，除氣霧劑供試品外，制備方法無變化。具體是膜劑供試品、腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品、氣霧劑供試品（2015版：氣霧劑、噴霧劑供試品）、貼劑、貼膏劑供試品（2015版：貼膏劑供試品）。

武漢世紀(jì)久海公司(多圖)-微生物檢測中心由武漢世紀(jì)久海檢測技術(shù)有限公司提供。武漢世紀(jì)久海檢測技術(shù)有限公司堅(jiān)持“以人為本”的企業(yè)理念，擁有一支高素質(zhì)的員工隊(duì)伍，力求提供更好的產(chǎn)品和服務(wù)回饋社會，并歡迎廣大新老客戶光臨惠顧，真誠合作、共創(chuàng)美好未來。世紀(jì)久海——您可信賴的朋友，公司地址：武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道666號生物創(chuàng)新園B4棟A313室，聯(lián)系人：顧問。