{微生物檢測}微生物分離純化

4、富集培養(yǎng)法

富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭，微生物限度檢查方法，在生長能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中，使其大量生長。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。

5、厭氧法

在實驗室中，為了分離某些yanyangjun，可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器，把這支試管放在沸水0浴中加熱數(shù)分鐘，純化水微生物限度檢查方法，以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧。然后快速冷卻，并進(jìn)行接種。接種后，加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面，使培養(yǎng)基與空氣隔絕。另一種方法是，在接種后，利用n2或co2取代培養(yǎng)基中的氣體，細(xì)菌微生物限度檢查方法，然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地分離某些yanyangjun，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。

6、單細(xì)胞(或單孢子)分離法

是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。較大的微生物，可采用毛細(xì)管提取單個個體。個體相對較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微zhen、鉤、環(huán)等挑取單個微生物細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。單細(xì)胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求。

配制培養(yǎng)基注意事項

1.滅菌時嚴(yán)格按照規(guī)定加熱、加壓，切忌時間過長壓力過高，否則會造成營養(yǎng)成分的破壞。

2.切忌使用銅鍋、鐵鍋配制培養(yǎng)基。

3.培養(yǎng)基不能二次高壓滅菌。

4.劃線用培養(yǎng)基可放入冰箱或培養(yǎng)箱除去水分。  

無菌操作注意事項

1.進(jìn)入無菌室之前先進(jìn)行空氣消毒，工作人員進(jìn)入無菌室以前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。

2.動作要輕，盡量減少走動，以免攪動空氣。

3.操作要靠近酒精燈火焰區(qū)，使用吸管要用吸球。

4.接種環(huán)/接種針用前用后進(jìn)行火焰滅菌。

5.工作結(jié)束作好終末消毒，所有培養(yǎng)物均應(yīng)高壓滅菌后再扔掉，以免污染環(huán)境。

   

計數(shù)方法適用性試驗

   1.供試液制備

   根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養(yǎng)基，不得超過1 小時。

   常用的供試液制備方法如下。如果下列供試液制備方法經(jīng)確認(rèn)均不適用，應(yīng)建立其他適宜的方法。

   （1）水溶性供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。

   （2）水不溶性非油脂類供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基制備成1：10供試液。分散力較差的供試品，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%的聚山梨酯80，使供試品分散均勻。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

   （3）油脂類供試品 取供試品，加入無菌十四烷酸異丙酯使溶解，或與zui少量并能使供試品乳化的無菌聚山梨酯80或其他無抑菌性的無菌表面活性劑充分混勻。表面活性劑的溫度一般不超過40℃（特殊情況下，zui多不超過45℃），空氣微生物限度檢查方法，小心混合，若需要可在水浴中進(jìn)行，然后加入預(yù)熱的稀釋液使成1：10供試液，保溫，混合，并在zui短時間內(nèi)形成乳狀液。必要時，用稀釋液或含上述表面活性劑的稀釋液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

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