常規(guī)堿基分子量：

11.如何溶解引物？

答：干燥后的引物質(zhì)地非常疏松，基因檢測多少錢，開蓋前好離心一下，pcr實(shí)驗(yàn)室，或管垂直向上在桌面上敲敲，將引物粉末收集到管底。根據(jù)計(jì)算出的體積加入去離子無菌水或10mM Tris pH7.5緩沖液，鎮(zhèn)江pcr，室溫放置幾分鐘，振蕩助溶，離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水，因?yàn)橛行┱麴s水的pH值比較低（pH4-5），引物在這種條件下不穩(wěn)定。

12.如何保存引物？

答：引物合成后，經(jīng)過一系列處理和純化步驟，旋轉(zhuǎn)干燥而成片狀物質(zhì)。引物在溶解前，室溫狀態(tài)下可以長期保存。溶解后的引物-20度可以長期保存。如果對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高，合成的OD數(shù)較大，建議分裝，避免反復(fù)凍融。修飾熒光引物需要避光保存。

蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定服務(wù)

蛋白質(zhì)（protein）是有機(jī)大分子，基因檢測怎么做，是構(gòu)成細(xì)胞的基本有機(jī)物和生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者。蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、新陳代謝、抵御外來物質(zhì)入l侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)是氨基酸序列，通過鑒定氨基酸序列來匹配它的蛋白質(zhì)，這是定性研究，是蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)，也是蛋白質(zhì)組學(xué)的重要技術(shù)之一。

質(zhì)譜一般由離子源、質(zhì)量分析器（Mass analyzer）和離子檢測器（Detector）三部分組成。傳統(tǒng)的質(zhì)譜僅用于小分子揮發(fā)物質(zhì)的分析，但隨著新的離子化技術(shù)的出現(xiàn)，如基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF)和電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)等，質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)為蛋白質(zhì)分析提供了一種新的途徑?，F(xiàn)在蛋白質(zhì)組學(xué)基本研究手段是：以生物質(zhì)譜技術(shù)為，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行大規(guī)模、高通量分離、鑒定和分析。

蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成肽段混合物，經(jīng)MAILDI或ESI等軟電離手段將其離子化，然后通過質(zhì)量分析器將具有特定質(zhì)核比的肽段離子分離開來。通過實(shí)際譜圖和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶消化后產(chǎn)生的一級(jí)質(zhì)譜峰圖和二級(jí)質(zhì)譜峰圖進(jìn)行的比對(duì)，進(jìn)行蛋白鑒定。

蛋白質(zhì)雙向電泳實(shí)驗(yàn)流程

1.三氯yi酸-bing酮沉淀法提取蛋白

2.雙向電泳分離待測樣品

(1)一相等電聚焦前處理按照所用儀器的廠商提供操作手冊(cè)進(jìn)行。蛋白質(zhì)上樣濃度不要超過10mg/mL，否則會(huì)造成蛋白質(zhì)的聚集或沉淀。

(2)等電聚焦完畢后(約需24hr），若不立即進(jìn)行第二相電泳，膠條可夾在兩層塑料薄膜中于-70℃保存數(shù)月。

(3)等電聚焦好的膠條按廠商提供的操作手冊(cè)平衡兩次。平衡完畢后，于電泳儀上用12.5%SDS-PAGE凝膠進(jìn)行電泳分離。儀器設(shè)置為2.5W/膠 45min，15W/膠 5-8hr，20℃。

3.銀染法對(duì)凝膠進(jìn)行染色

(1)固定(2)清洗(3)增敏(4)清洗(5)染色(6)清洗(7)顯影(8)定影(9)水洗

3.凝膠掃描及圖像分析

(1)圖像掃描：凝膠染色后采用Image scanner以300dpi，16-bit模式（65536灰階）進(jìn)行掃描。

(2)圖像分析：掃描完畢后，凝膠繼續(xù)置于1%yi酸中于4℃保存。掃描后的圖像用ImageMaster 2D Platinum software軟件進(jìn)行分析。分析按照軟件廠商提供的說明書進(jìn)行。以zui小點(diǎn)面積30，平滑度2為主要參數(shù)zui大限度檢測蛋白質(zhì)點(diǎn)。以目標(biāo)蛋白質(zhì)3個(gè)重復(fù)具有相同趨勢，目標(biāo)蛋白質(zhì)相鄰位點(diǎn)的相對(duì)一致性，至少2個(gè)重復(fù)有2倍以上差異作為判定差異表達(dá)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)。

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