小鼠精原gan細胞分離富集和培養(yǎng)

成年小鼠gao丸中約有108個細胞，其中約有 2×104個是精原gan細胞，僅占gao丸生精上皮細胞總數(shù)的 0.02～0.03%，精原gan細胞數(shù)量太少不利于體外培養(yǎng).分離和富集精原gan細胞成為精原gan細胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件.尋找分離和富集小鼠精原gan細胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠為實驗對象，先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min，細胞實驗外包公司，用胎牛xue清終止消化，用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單 細胞懸液，30%percoll不連續(xù)密度梯度法離心富集精原gan細胞，再根椐未分化精原gan細胞表面thy1.2(CD90.2)陽性CD117(c- kit)陰性特點用流式細胞儀將精原gan細胞分選出來，并在體外進行培養(yǎng)嘗試. 結果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細胞占13.80±3.34%，CD90.2陽性細胞占28.98±4.51%， 二者都陽性細胞占8.98±2.98%，CD117陰性CD90.2陽性細胞占18.36±2.67%;離心后 CD117(c-kit)陽性細胞占12.37±3.34%，四川細胞實驗，CD90.2陽性細胞占56.98±4.51%，二者都陽性細胞占 8.20±3.98%，CD117陰性CD90.2陽性細胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)陽性細胞和二者都陽性細胞所占百分比前后 比較差異無顯著性(P>0.1)，CD90.2陽性細胞和CD117陰性和CD90.2陽性細胞所占百分比前后比較差異有顯著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標志分子，percoll離心后細胞懸液經FACS分選后獲得細胞純度

選擇實驗外包公司需要注意哪些事項？

報價

報價單一定要有明細。規(guī)范的外包公司會根據(jù)實驗方案里的各項內容進行核算報價，材料是多少、人工檢測是多少，可以看到每一筆錢花在哪里，細胞實驗外包費用，避免籠統(tǒng)的報價。另外注意不要一味地追求，做過實驗的都知道實驗成本，外包還需要考慮人工成本。如果價格過低，實驗數(shù)據(jù)就難以保證可靠和來源了。當然報價也不能虛高，做好是能在有限的經費中盡量保證課題完整性?？梢砸蠊靖鶕?jù)預算來調整優(yōu)化方案，盡可能節(jié)約成本。

細胞增殖檢測

     本公司應用MTT比色法， 檢測細胞存活和生長。其檢測原理為huo細胞內線粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源性無色的MTT形成藍色的結晶Formazan，并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二jia基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的Formazan，用酶聯(lián)mian疫檢測儀在一定波長處測定其光吸收值，可間接反映huo細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。

     該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫liu藥wu篩選、細胞毒性試驗、以及腫liu放she敏感性測定等。服務內容      1. 細胞接種：收到客戶細胞后，我們會用細胞計數(shù)板計數(shù)細胞，得出細胞懸液濃度。計算出應稀釋的倍數(shù)，按MTT試劑盒要求在96孔板內接種 相應濃度的細胞懸液；

     2. 細胞培養(yǎng)：然后在無菌恒溫細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)接種好的96孔細胞培養(yǎng)板，并實時觀察細胞狀態(tài)；  

     3. yao物處理并呈色：按不同濃度梯度加入yao物作用細胞；

     4. 溶解，比色：加入MTT檢測試劑，按操作要求孵育相應時間，在mei標儀內檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結果。

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