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6、控制污染的方法。
已設(shè)計出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染-使用UNG,這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線,這種方法不能完全消除污染問題,但可以將污染降低幾個數(shù)量級。
7、后PCR區(qū)PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù),應(yīng)該留出一個專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的,凈化工程費(fèi)用,決不能把實(shí)驗室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。
⑴可以把即刻可用的"主混合物"溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃,在實(shí)驗室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時這樣做很有用。⑵如果你的實(shí)驗室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì),可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個規(guī)則,應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時做,凈化工程公司,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染,陰性對照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。⑸當(dāng)做陽性對照時,有兩個理由決定了應(yīng)該使用少數(shù)量的核酸。⑹由于必須有對照反應(yīng),對照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。
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