DNA限制性內(nèi)切酶酶切

影響條件：DNA純度、緩沖液、溫度條件及限制性內(nèi)切酶本身都會影響限制性內(nèi)切酶的活性。大部分限制性內(nèi)切酶不受RNA或單鏈DNA的影響。

處理方法：當(dāng)微量的污染物進(jìn)入限制性內(nèi)切酶貯存液中時，會影響其進(jìn)一步使用，因此在吸取限制性內(nèi)切酶時，每次都要用新的吸管頭。如果采用兩種限制性內(nèi)切酶，必須要注意分別提供各自的zui適鹽濃度。若兩者可用同一緩沖液，則可同時水解。若需要不同的鹽濃度，則低鹽濃度的限制性內(nèi)切酶必須首先使用，隨后調(diào)節(jié)鹽濃度，再用高鹽濃度的限制性內(nèi)切酶水解。也可在第yi個酶切反應(yīng)完成后，用等體積酚/氯1仿抽提，加0.1倍體積3mol/L NaAc和2倍體積無水乙醇，混勻后置-70℃低溫冰箱30分鐘，離心、干燥并重新溶于緩沖液后進(jìn)行第二個酶切反應(yīng)。

一般是以微生物屬名的第yi個字母和種名的前兩個字母組成，第四個字母表示菌株（品系）。例如，快切酶，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內(nèi)切酶稱為Bam H，在同一品系細(xì)菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI、HpaⅡ，MboI、MboⅡ等。

別名：restriction endonuclease簡稱限制酶

酶反應(yīng)：限制性內(nèi)切酶能分裂DNA分子在一限定數(shù)目的專一部位上。它能識別外源DNA并將其降解。

單位定義：在指明pH與37℃，在0.05mL反應(yīng)混合物中，1小時消化1μg的λDNA的酶量為1單位。

性狀制品不含非專一的核酸水解酶（由10單位內(nèi)切酶與1μg λDNA，保溫16小時所得的凝膠電泳圖譜的穩(wěn)定性表示），這類酶主要是從原核生物中分離出來的，迄今已經(jīng)從近300多種不同的微生物中分離出約4000種限制酶。

限制性內(nèi)切酶能特異地結(jié)合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。它可分為三類：

Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質(zhì)分子中兼有切割和修飾（甲1基化）作用且依賴于ATP的存在。Ⅰ類酶結(jié)合于識別位點并隨機(jī)的切割識別位點不遠(yuǎn)處的DNA，而Ⅲ類酶在識別位點上切割DNA分子，然后從底物上解離。

Ⅱ類由兩種酶組成： 一種為限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶），它切割某一特異的核苷酸序列； 另一種為獨立的甲1基化酶，它修飾同一識別序列。Ⅱ類中的限制性內(nèi)切酶在分子克1隆中得到了廣泛應(yīng)用，它們是重組DNA的基礎(chǔ)。絕大多數(shù)Ⅱ類限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列（如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列：5"- G↓AATTC-3"），有少數(shù)酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中，有的在對稱軸處切割，產(chǎn)生平末端的DNA部分片段（如SmaⅠ：5"-CCC↓GGG-3"）；有的切割位點在對稱軸一側(cè)，產(chǎn)生帶有單鏈突出末端的DNA部分片段稱粘性末端，如EcoRⅠ切割識別序列后產(chǎn)生兩個互補(bǔ)的粘性末端。

快切酶-友名生物由武漢友名生物技術(shù)有限公司提供。武漢友名生物技術(shù)有限公司是一家從事“商務(wù)服務(wù)”的公司。自成立以來，我們堅持以“誠信為本，穩(wěn)健經(jīng)營”的方針，勇于參與市場的良性競爭，使“友名生物”品牌擁有良好口碑。我們堅持“服務(wù)至上，用戶至上”的原則，使友名生物在其它中贏得了客戶的信任，樹立了良好的企業(yè)形象。 特別說明：本信息的圖片和資料僅供參考，歡迎聯(lián)系我們索取準(zhǔn)確的資料，謝謝！