細(xì)胞增殖是生活1細(xì)胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征。細(xì)胞的增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。

越來(lái)越多的研究者們已經(jīng)把目光集中到了細(xì)胞增殖檢測(cè)，關(guān)于細(xì)胞增殖檢測(cè)的方法也在不斷更新。那么到目前為止，研究細(xì)胞增殖有哪些手段呢？

細(xì)胞增殖檢測(cè)是評(píng)估細(xì)胞健康程度、遺傳毒性及抗腫1瘤medicine效果的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)手段。準(zhǔn)確的檢測(cè)細(xì)胞增殖方法是BrdU法。而EdU法檢測(cè)試劑盒是Brdu方法的革命性突破。EdU試劑盒是一種嘧1啶類似物，可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。通過(guò)以上原理圖的對(duì)比，大家不難發(fā)現(xiàn)，EdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖，無(wú)須抗1體，無(wú)變性步驟，保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性，是一種簡(jiǎn)單，可靠，省事的創(chuàng)新方法。

回收產(chǎn)物的檢測(cè)

1.紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)DNA在OD260處有明顯吸收峰，當(dāng)OD260=1時(shí)，相當(dāng)于大約50 ng/μL雙鏈DNA、40 ng/μL單鏈DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9時(shí)，說(shuō)明DNA純度較高。若洗脫時(shí)不用洗脫緩沖液，而是用去離子水，會(huì)使比值偏低，因?yàn)殡x子的存在會(huì)影響吸光度。但不表示純度低。

2.SYBR法檢測(cè)取回收產(chǎn)物1 μL，與1 μL SYBR染料混勻，于熒光透1視儀下觀察是否有黃綠色熒光。

3.瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)取回收產(chǎn)物5 μL，與10×Loading Buffer混勻，DNA Marker加5 μL，電泳后凝膠成像觀察。5 μL DNA Marker相當(dāng)于每個(gè)條帶50 ng DNA，觀察目的條帶亮度大致為Marker的兩倍，則大致估算其濃度約為20 ng/μL。

PCR產(chǎn)物的回收（膠回收試劑盒）

1.膠回收的目的（1）去除非特異性擴(kuò)增的產(chǎn)物（2）去除多余的底物（3）去除多余的Taq酶（4）得到目的片段

2.膠回收的過(guò)程（1）切膠：紫外下切膠，稱重。之后用頭將膠塊搗碎。切膠的刀片建議選用一次性刀片，通用RNA提取，實(shí)驗(yàn)臺(tái)等也盡可能用乙醇擦拭干凈?？赏ㄟ^(guò)空EP管與裝膠EP管質(zhì)量的差值計(jì)算膠的質(zhì)量。注意切膠時(shí)盡可能避免切到條帶外的凝膠，且避免紫外時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。別忘記膠條有厚度，前后多余的部分也盡量切除。（2）溶膠：每1 mg膠加入1 μL膜結(jié)合液（MB），按比例1:1加入MB，55℃水浴溶解。每1~2 min震蕩混勻，待溶解后至少在水浴中保持1~2 min，保證膠塊完全溶解。在電泳過(guò)程中，DNA會(huì)與大分子的多糖緊密結(jié)合，凝膠的種類和質(zhì)量不同，DNA與之結(jié)合力也不同，只有凝膠充分溶解DNA才能充分釋放。否則，凝膠將與DNA一起沉淀下來(lái)，洗脫后將影響回收結(jié)果的純度。（3）結(jié)合：將溶膠轉(zhuǎn)移至純化柱內(nèi)，12000 rpm離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將純化柱重新插回收集管中。膠塊完全溶解后建議將膠液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)榧兓跍囟容^高時(shí)結(jié)合DNA的能力較弱。

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