激酶、磷酸酶、磷酸化酶的區(qū)別？

激酶催化磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，比如己糖激酶。

磷酸酶催化磷酸基團(tuán)的水解，與激酶正好相反。

磷酸化酶催化磷酸解反應(yīng)，比如糖原磷酸化酶，催化糖原生成磷酸葡萄糖。這其實(shí)是磷酸解，要是水解就生成葡萄糖了。當(dāng)然一般習(xí)慣上還是說水解。

激酶催化的反應(yīng)一般也叫磷酸化，這沒什么錯(cuò)誤，只是和磷酸化酶容易混淆。

T4 RNA連接酶

用途：用RNA 3"末端標(biāo)記；RNA和RNA分子間連接；寡核苷酸的環(huán)化；tRNA修飾；5" RACE中寡核苷酸連接到cDNA單鏈；在蛋白質(zhì)特定位點(diǎn)引入非天然氨基酸。

來源：由大腸桿1菌表達(dá)，表達(dá)基因的來源為T4嗜菌體。

活性定義：37℃30分鐘內(nèi)，催化1 nmol 5"-[P]-(A)12-18成為磷酸酶不能消化的環(huán)形產(chǎn)物所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。

活性檢測條件：50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，10mM DTT，ＤＮＡ污染去除，1mM ATP，10μM 5"-[P]-(A)12-18(10μM in 5"-termini)。

純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷1酸酯酶。

酶儲存溶液：10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，50mM KCl，0.1mM EDTA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT。

DNA新鏈的延伸由DNA聚合酶 III所催化。為了copy的不斷進(jìn)行，解旋酶須沿著模板前進(jìn)， 邊移動邊解開雙鏈。由于DNA的解鏈，在DNA雙鏈區(qū)勢必產(chǎn)生正超螺旋，在環(huán)狀DNA中更為明顯，當(dāng)達(dá)到一定程度后就可能造成copy叉難以再繼續(xù)前進(jìn)，但在細(xì)胞內(nèi)DNA的copy不會因出現(xiàn)拓?fù)鋵W(xué)問題而停止，因?yàn)橥負(fù)洚悩?gòu)酶會解決這一問題。

隨著引發(fā)體合成RNA引物，DNA聚合酶 III開始不斷地將引物延伸，合成DNA。DNA聚合酶 III是一個(gè)多亞基復(fù)合二聚體，一個(gè)單體用于前導(dǎo)鏈的合成，另一個(gè)單體用于滯后鏈的合成，因此它可以在同一時(shí)間分別copyDNA前導(dǎo)鏈和滯后鏈。雖然DNA前導(dǎo)鏈和滯后鏈copy的方向不同，但如果滯后鏈模板環(huán)繞DNA聚合酶III，并通過DNA聚合酶 III，然后再折向未解鏈的雙鏈DNA的方向，則滯后鏈的合成可以和前導(dǎo)鏈的合成在同一方向進(jìn)行。

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