RNA病毒檢測試劑盒用于定性檢測和分析RNA病毒和RNA分子，特別適合檢測病毒等此類病毒。

組分1. ConviFlex? RT-Taq Mix的凍干粉包含：MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq聚合酶及dNTP。

其中MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶，來自小鼠白血1病病毒（M-MuLV）并經(jīng)過基因修飾。

這里的Taq聚合酶另兼具熱啟動功能。

此Taq酶在室溫下，活性被抗1體所抑制，當(dāng)溫度達(dá)到70°C以上時，才會被完全激1活。

在70°C 以下時，由于Taq酶沒有完全活化，因此實驗不會產(chǎn)生非特異性PCR產(chǎn)物和引物二聚體。熱啟動Taq酶的使用可使PCR具有更高的特異性和靈敏度。

DNA提取過程中各種試劑的作用及原理

　　溶液I—溶菌液：

　　溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌體細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分肽聚糖中的β-1，4糖苷鍵，因而具有溶菌的作用。當(dāng)溶液中pH小于8時，核酸提取，溶菌酶作用受到抑制。

　　葡萄糖：增加溶液的粘度，維持滲透壓，防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解。

　　EDTA：

　　(1)螯合Mg2 、Ca2 等金屬離子，抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基);

　　(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因為溶菌酶的反應(yīng)要求有較低的離子強(qiáng)度的環(huán)境。

在選用支原體PCR法檢測來替代藥典方法時，需要考慮如下兩個方面：

首先一步是要使用符合歐洲藥典要求，經(jīng)過全方面驗證的支原體檢測試劑盒，第二部是自我驗證，即確認(rèn)所用的樣本基質(zhì)對于該試劑盒方法是合適的，并且操作過程是正確的。小規(guī)模的室內(nèi)驗證通常需要采用三個不同批次的試劑盒，然后加入10CFU的標(biāo)準(zhǔn)品，做復(fù)孔（通常是8個復(fù)孔），并且至少選擇3個支原體物種進(jìn)行驗證。

有的支原體標(biāo)準(zhǔn)品廠家會提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值，以方便二者的換算。因為10CFU只能確定PCR能夠達(dá)到的檢測限在10CFU以下，但無法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標(biāo)定的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品則可進(jìn)一步確定檢測限的數(shù)值。

總之，PCR方法很有用，但需要避免假陰性，驗證時應(yīng)使用陽性對照、陰性對照、無模板對照和內(nèi)控對照，以保證PCR反應(yīng)正常，以及支原體少量存在時確實能檢出來，支原體不存在時也確保是結(jié)果陰性，從而使得PCR方法在工業(yè)應(yīng)用時能確保zui終結(jié)果的可靠。

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