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問:如何使用PHENODRIVE(PHENODRIVE 作為一款人工合成的、非動物源性的新一代細胞、組織培養(yǎng)用基質(zhì)膠(基質(zhì)凝膠)人工合成新型非動物源性的用于細胞培養(yǎng)的基質(zhì)膠、凝膠或稱為基質(zhì)凝膠)凍干粉末?
答:在乙醇或任何水介質(zhì)中溶解, 將基質(zhì)粉末稀釋至0.01mg/mL至0.1mg/mL的濃度,在pH值7.4 的無菌緩沖溶液中, 或在75% 乙醇(用于快速涂布)中并過濾。
PHENODRIVE凍干粉末的使用方法:
與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基質(zhì)膠相比, 我們的合成基質(zhì)膠使用過程極為簡單, 在室溫下即可實現(xiàn)重組使用, 這里就 PHENODRIVE的標準應用流程介紹如下:
由于PHENODRIVE 是以無菌凍干粉末狀態(tài)進行存儲的, 因此在使用時需要對其進行重組。技術(shù)參數(shù):1噴絲頭,采用橫向配置,Thebiggest可連接針數(shù)為2,Maximum靜電紡絲距離5-17厘米,噴絲板的掃描速度0-30毫米/秒,運動范圍(噴絲板的位置)0-30厘米。實驗人員可以根據(jù)需求,取適量的粉末將其溶解進水、乙醇或培養(yǎng)液中, 這個過程非常簡單, 待其溶解后得到無色、透明液體經(jīng)過濾后即可準備用于培養(yǎng) ,細胞培養(yǎng)合成基質(zhì)膠, 這一過程即重組。重組后的液體可在-20℃ 的低溫下保存3至少3個月。
對于這類耗材表面的涂布應用, 通常建議將PHENODRIVE 凍干粉末溶解進75% 的乙醇中, 按要求的濃度進行重組, 將經(jīng)過濾的重組溶液澆鑄在需要涂布的器皿表面,并在無菌的環(huán)境下讓其自然蒸發(fā)(建議紫外線照射的無菌環(huán)境下), 待溶劑蒸發(fā)盡后, 即在器皿表面留下一層透明的薄膜,即完成涂布的過程。此段時期,靜電紡絲技術(shù)的發(fā)展大致經(jīng)歷了四個階段:1階段主要研究不同聚合物的可紡性和紡絲過程中工藝參數(shù)對纖維直徑及性能的影響以及工藝參數(shù)的優(yōu)化等。
建議:在無情況下種植細胞, 待細胞粘附后再添加, 比如在細胞種植3小小時后。
如果采用乙醇溶液進行重組, 應確保所使用的聚合物支架不溶于乙醇 。按照粉末重組步驟,基質(zhì)膠, 然后用移液器移取足夠的重組溶液將支架完全覆蓋, 同樣采用自然蒸發(fā)的方法在支架的表面及空期間形成一層透明的薄膜。
溶解待培養(yǎng)細胞類型的無組織培養(yǎng)基中的PHENODRIVE, 方法是按照粉末步驟配置適當濃度的重組透明重組溶液,再將從組后的溶液與細胞懸浮液混合, 以達到0.001% ~1%(V/V)的終 PHENODRIVE 濃度。這樣,靜電霧化技術(shù)的研究也為靜電紡絲體系提供了一定的理論依據(jù)和基礎。細胞懸浮液的典型細胞濃度是40000個/ml ~1000000個/ml。
PHENODRIVE凍干粉末如何重組?
由于PHENODRIVE 是以無菌凍干粉末狀態(tài)進行存儲的, 因此在使用時需要對其進行重組。其次,作為靜電紡納米纖維全新的研究領(lǐng)域—納米蛛網(wǎng)的研究還在初期階段,納米蛛網(wǎng)的形成過程的理論分析和模型建立尚需深入研究。實驗人員可以根據(jù)需求,基質(zhì)膠影響顯微鏡觀察,取適量的粉末將其溶解進水、乙醇或培養(yǎng)液中,康寧三維培養(yǎng)基質(zhì)膠, 這個過程非常簡單, 待其溶解后得到無色、透明液體經(jīng)過濾后即可準備用于培養(yǎng) , 這一過程即重組。重組后的液體可在-20℃ 的低溫下保存3至少3個月。
重組溫度: 室溫即可;
重組環(huán)境: 推薦有紫外線照射滅菌的環(huán)境;
過濾孔徑: 0.22um;
溶液要求: 用于溶解PHENODRIVE的溶液PH值建議約7.4;
重組濃度: 建議范圍 0.01mg/ml ~0.1mg/ml, 通常濃度越高對于培養(yǎng)細胞表型的影響、控制時間越久, 0.01mg/ml的濃度影響、控制時間約3天, 而0.1mg/ml的則可以達到15天;
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