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原子數(shù)由m個氨基酸,n條肽鏈組成的蛋白質(zhì)分子,至少含有n個—COOH,至少含有n個—NH2,肽鍵m-n個,O原子m n個。分子質(zhì)量設(shè)氨基酸的平均相對分子質(zhì)量為a,含b個二硫鍵,蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量=ma-18(m-n)-2b基因控制基因中的核苷酸 6信使RNA中的核苷酸 3蛋白質(zhì)中氨基酸 1。蛋白質(zhì)是由C(碳)、H(氫)、O(氧)、N(氮)組成,一般蛋白質(zhì)可能還會含有P(磷)、S(硫)、Fe(鐵)、Zn(鋅)、Cu(銅)、B(硼)、Mn(錳)、I(碘)、Mo(鉬)等。這些元素在蛋白質(zhì)中的組成百分比約為:碳50% 氫7% 氧23% 氮16% 硫0~3% 其他微量。
(1)一切蛋白質(zhì)都含氮元素,且各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近,均為16%;
(2)蛋白質(zhì)系數(shù):任何生物樣品中每1g元氮的存在,就表示大約有100/16=6.25g蛋白質(zhì)的存在, 6.25常稱為蛋白質(zhì)常數(shù)。
微量凱氏(kjeldahl)定氮法
樣品與濃1硫酸共熱。含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨(消化),氨又與硫酸作用,變成硫酸氨。經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據(jù)此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例,其反應(yīng)式如下:
NH2 CH2 COOH 3H2 SO4 ――2CO2 3SO2 4H2O NH3 (1)
2NH3 H2 SO4 ――(NH4 )2 SO4 (2)
(NH4 )2 SO4 2NaOH――2H2 O Na2 SO4 2NH3 (3)
反應(yīng)(1)、(2)在凱氏瓶內(nèi)完成,反應(yīng)(3)在凱氏蒸餾裝置中進(jìn)行。為了加速消化,可以加入CuSO4作催化劑,K2SO4以提高溶液的沸點(diǎn)。收集氨可用硼酸溶液,滴定則用強(qiáng)酸。實(shí)驗(yàn)和計算方法這里從略。計算所得結(jié)果為樣品總氮量,如欲求得樣品中蛋白含量,應(yīng)將總氮量減去非蛋白氮即得。如欲進(jìn)一步求得樣品中蛋白質(zhì)的含量,即用樣品中蛋白氮乘以6.25即得。
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