實驗操作小貼士

1、實驗應(yīng)在超凈工作臺或者生物安全柜內(nèi)進(jìn)行；

2、實驗的過程中選擇尺寸的手套并能及時更換，在進(jìn)出不同實驗區(qū)域或進(jìn)行模板操作后都應(yīng)更換實驗服、口罩、帽子及手套，以避免不同實驗區(qū)交叉污染；

3、裝有PCR試劑的反應(yīng)管在打開之前應(yīng)先瞬時離心，將管壁及管蓋上的液體離至管底，降低污染手套或加樣器的風(fēng)險；謹(jǐn)慎開啟反應(yīng)管，防止管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠導(dǎo)致污染；需要高溫加熱的樣本，可采用封口膜進(jìn)行PCR管蓋密封，避免管蓋應(yīng)受熱而發(fā)生彈開；

4、吸加試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)范要求進(jìn)行，核酸檢測實驗室PCR多少錢，遵守“慢吸快打”原則，盡量一次性完成，忌多次抽吸，以避免氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染；

5、PCR試劑建議小量分裝，以減少反復(fù)凍融、重復(fù)取樣次數(shù)和反復(fù)使用過程中的試劑污染；多樣本PCR反應(yīng)時，先配制反應(yīng)混合液分裝至反應(yīng)管中，加入樣本核酸，請勿同時開蓋，盡量保證單人單管，實現(xiàn)完全閉管操作；

6、實驗試劑應(yīng)與樣品和PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同處；

7、PCR擴(kuò)增實驗完成后及時將反應(yīng)管取出，用一次性手套或者塑封袋將產(chǎn)物反應(yīng)管包裹丟棄，保證管蓋緊閉；

8、實驗室自配試劑（去離子水、緩沖液等）和所有使用器具在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或紫外殺菌，尖、反應(yīng)管等實驗耗材應(yīng)一次性使用。

pcr輔料質(zhì)檢的基本原則

輔料的質(zhì)檢通常是在新一批的輔料到實驗室后統(tǒng)一做一次或者定期（半年或1年）做，因此質(zhì)檢就包含了驗貨和質(zhì)檢2個部分。由于輔料的質(zhì)檢沒有一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，一般由各實驗室自行制定，可簡可繁，這里提出一些方法供大家參考和批評指正。

1.外包裝檢查：外包裝應(yīng)完整無損無污，標(biāo)識清楚，檢查品名、品牌，貨號，規(guī)格、生產(chǎn)日期，有效期、保存條件等信息。

2.內(nèi)包裝檢查：內(nèi)包裝物品應(yīng)與外包裝標(biāo)識一致，核酸檢測實驗室PCR設(shè)計，檢查是否有破損，泄漏，內(nèi)容物是否齊全，是否有相應(yīng)的使用說明書等。

3.性能質(zhì)檢：檢測試劑耗材是否與其性能一致，比如吸頭的準(zhǔn)確性和氣密性等

4.污染物質(zhì)檢：檢測試劑耗材是否被常規(guī)檢測項目的待檢物污染，這種污染可能是物品生產(chǎn)環(huán)節(jié)，也可能是運輸或?qū)嶒炇业谋４孢^程中被污染。

5.抑制物質(zhì)檢：檢測試劑耗材中是否存在PCR反應(yīng)的抑制物，比如核酸酶。

這些常見物品的外表面容易被核酸和細(xì)菌污染，主要查看這兩個指標(biāo)。

（1）表面核酸污染：用沾濕的拭子擦拭上述物品的外表面，然后浸泡到純水中10min，吸取純水作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR無擴(kuò)增為合格。

（2）移液器內(nèi)腔核酸污染：對于常用的移液器的內(nèi)部，可使用無濾芯的吸頭在陰性純水中吹吸10次后，吸取純水作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR無擴(kuò)增為合格。

（3）表明細(xì)菌污染：用沾濕的無菌拭子擦拭上述物品的外表面，劃瓊脂平板，每個平板的菌落數(shù)不應(yīng)超過一定數(shù)量（我也不確定多少合適，由于不要求無菌操作一定會有細(xì)菌，但是也不應(yīng)該太多）。

非瘟和新冠后一下子新增了很多核酸檢測實驗室，昌樂核酸檢測實驗室PCR，早期大家關(guān)注的點都在設(shè)施和硬件上，但是一個檢測實驗室開展大量檢測工作之后，檢測中弱的環(huán)節(jié)決定檢測的質(zhì)量。我們也需要將精力放在檢測中的每個細(xì)節(jié)上。

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