闌尾炎動物模型

方法  成年大鼠，后固定，無菌條件下開腹，將闌尾及末端回腸和與闌尾系膜相連的腸段(下稱臨近腸段)移出腹腔并置壁上。剪開闌尾尖部的闌尾系膜，把闌尾尖部腸內(nèi)容物擠至闌尾近端腸腔內(nèi)，距尖部1cm處用1號絲線將闌尾管攀結(jié)扎。把結(jié)扎了的闌尾尖部擺放在回腸根部和臨近腸段之間。用小圓針細(xì)絲線(000號)把回腸根部和臨近腸段相應(yīng)位置縫合一針(僅穿透漿肌層)，后將結(jié)扎闌尾包埋于其下。再順續(xù)沿末端回腸由遠(yuǎn)端至近端與臨近腸段相應(yīng)位置緊密縫合1～2針，可以做動物實(shí)驗的公司，將闌尾全部包埋在縫合的腸段之下。將外置的全部腸段送入腹腔，兩層縫合關(guān)腹，無菌紗布包扎傷口，送回籠中飼養(yǎng)觀察?；虺赡昙彝?，后固定于手術(shù)臺架上，備皮消毒鋪巾后，無菌條件下腹正中切口開腹6cm，尋及盲腸提出闌尾，于闌尾根部以4號絲線緊貼闌尾壁穿過系膜結(jié)扎闌尾，隨后將闌尾納回腹腔，逐層關(guān)腹。術(shù)后，在規(guī)定的時間點(diǎn)測定動物體溫，行壞死闌尾炎腔內(nèi)容物細(xì)菌培養(yǎng)，包囊或壞死闌尾大小的檢測，以及肉眼病理觀察和組織形態(tài)學(xué)改變的鏡檢。

特點(diǎn)  大鼠術(shù)后15d，闌尾呈膿性壞死，外裹一層纖維性包囊，囊內(nèi)含有大量的細(xì)菌，模型成功率高。兔術(shù)后6～12h，闌尾充血、增粗、水腫；12～24h時，闌尾腫脹、增粗更為明顯，外被膿苔與周圍腸管粘連，部分闌尾壁可見斑點(diǎn)狀出血灶，腹腔內(nèi)有膿性滲液出現(xiàn)。與闌尾膿苔粘連的周圍腸管亦呈明顯的水腫、充血，甚或有闌尾系膜形成。腹腔滲液細(xì)菌培養(yǎng)有大腸生長。術(shù)后24h，動物實(shí)驗，兔體溫可升至40℃左右。在整個造模過程中，臨床前動物實(shí)驗，模型動物神態(tài)萎靡，不食不飲，腹部脹滿，2～4d內(nèi)陸續(xù)。

前l(fā)ie腺素E2對大鼠巨噬細(xì)胞株NR8383 合成血管內(nèi)皮生長因子促進(jìn)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞成管、遷移的影響

　　方法：分別采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2 10 nmol/L EP2受體抑zhi劑AH6809 10 nmol/L EP4受體抑zhi劑AH23848 處理的NR8383 細(xì)胞作為各實(shí)驗組，選擇未經(jīng)PGE2以及其特異性受體抑zhi劑處理的NR8383 細(xì)胞作為對照組，采用Western blot 和qPCR方法檢測各組NR8383細(xì)胞內(nèi)VEGF蛋白以及mRNA的表達(dá)水平；收集以上各處理組的細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別刺激1HUVECs，運(yùn)用TRANSWELL 小室、Matrigel 膠細(xì)胞成管實(shí)驗等實(shí)驗方法，觀察PGE2調(diào)控巨噬細(xì)胞對HUVEC 遷移效應(yīng)和成管能力的影響。

　　結(jié)果：隨著NR8383 細(xì)胞培養(yǎng)液中加入PGE2濃度增gao，其 VEGF蛋白表達(dá)和VEGF mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）；0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2處理過的NR8383細(xì)胞培養(yǎng)上清液可以顯著增加HUVEC細(xì)胞形成的小管面積，形成小管面積隨著PGE2處理濃度的增加而增加（P<0.05）；HUVECs的遷移運(yùn)動也隨著PGE2處理濃度的升高不同程度的增強(qiáng)，HUVECs趨化的數(shù)量顯著升高（P<0.05）；研究發(fā)現(xiàn)PGE2特異性的EP2/EP4 受體拮抗劑AH6809/AH23848，可以顯著抑制PGE2 增強(qiáng)NR8383 細(xì)胞內(nèi)VEGF mRNAs 表達(dá)的作用并且也顯著抑制PGE2 增強(qiáng) NR8383細(xì)胞促進(jìn)HUVECs成管和趨化能力的效應(yīng)（P<0.05）。

　

實(shí)驗動物的采集方法

1. 大鼠、小鼠的采集：用頸椎脫臼法處死動物，剝離出胸骨或股骨，用吸取少量的Hank平衡鹽溶液，沖洗出胸骨或股骨中全部液。如果是取少量的作檢查，可將胸骨或股骨剪斷，將其斷面的擠在有稀釋液的玻片上，混勻后涂片涼干即可染色檢查。

2. 大動物的采集：狗等大動物的采集可采取穿刺方法。 先將動物、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計好皮膚到的距離，把穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點(diǎn)周圍的皮膚繃緊，右手將穿刺針在穿刺點(diǎn)垂直刺入，穿入固定后，輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入，動物實(shí)驗室，當(dāng)穿刺針進(jìn)入腔時常有落空感。狗的采集，一般采用髂骨穿刺。

狗等大動物常用的穿刺點(diǎn)：胸骨：穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各點(diǎn)的中點(diǎn)。脛骨：穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔，防止發(fā)生。

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