**近的研究已經(jīng)確定了陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強(qiáng)了它們?cè)隗w內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的能力。這些特征包括陽(yáng)離子頭基團(tuán)及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關(guān)系，醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈，成對(duì)的油基鏈作為疏水系鏈。無(wú)論如何，這些特征雖然不能決定細(xì)胞培養(yǎng)中更好的轉(zhuǎn)染能力，但可以在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)更好的核酸遞送。因此，必須謹(jǐn)慎對(duì)待體外和細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果，不能必然地用來(lái)推斷核酸載體在體內(nèi)的潛力。當(dāng)這些囊泡在體內(nèi)引入時(shí)，其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質(zhì)體時(shí)遇到的毒性通常與制劑中陽(yáng)離子脂質(zhì)與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質(zhì)體的劑量密切相關(guān)。較高的電荷比通常對(duì)多種細(xì)胞類型的毒性更大，包括*細(xì)胞系。另外，不同的試劑對(duì)細(xì)胞的毒性程度不同，毒性是細(xì)胞特異性的。目前市面上有超過(guò)30種不同的商用CL制劑品種可供選擇。由于毒性，脂質(zhì)體的體內(nèi)遞送必須盡可能靠近目標(biāo)部位，以盡量減少副作用。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有影響。河北siRNA轉(zhuǎn)染試劑

陽(yáng)離子聚合物是一種非病毒載體，其結(jié)構(gòu)的一個(gè)共同特征是分子中存在許多帶正電的基團(tuán)，這些基團(tuán)被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。陽(yáng)離子聚合物可以通過(guò)靜電相互作用結(jié)合核酸，并將其凝聚成小的納米顆粒。正電荷改善了與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜的相互作用，并幫助多聚體在溶酶體降解發(fā)生之前逃離核內(nèi)體。隨后，多聚體通過(guò)陽(yáng)離子聚合物上帶正電基團(tuán)介導(dǎo)的質(zhì)子海綿效應(yīng)從核內(nèi)體中逸出。此外，核酸必須與陽(yáng)離子聚合物分離，才能**終發(fā)揮其功能。成功的核酸轉(zhuǎn)染需要轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性低。在確定陽(yáng)離子聚合物是否是合適的核酸轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，必須考慮這兩個(gè)特點(diǎn)。一般認(rèn)為，陽(yáng)離子聚合物的分子量越高，其包封核酸和被細(xì)胞攝取的能力越強(qiáng)，細(xì)胞活力和核酸釋放越差。另一方面，分子量越低的聚合物，其濃縮核酸和被細(xì)胞攝取的能力就越低，但在細(xì)胞毒性和核酸釋放方面則表現(xiàn)得更好。因此，轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)慎重考慮陽(yáng)離子聚合物的分子量。一些化學(xué)修飾，如聚乙二醇化和膽固醇修飾，可以***改善聚合物的性能。此外，可生物降解材料是降低細(xì)胞毒性的有效手段。湖北天津轉(zhuǎn)染試劑與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過(guò)基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細(xì)胞。

在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。例如，siRNA*對(duì)一個(gè)靶標(biāo)具有高度特異性，而miRNA具有調(diào)節(jié)多個(gè)下游靶標(biāo)的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長(zhǎng)度寡核苷酸來(lái)模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應(yīng)。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標(biāo)mRNA結(jié)合以抑制其功能，從而導(dǎo)致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補(bǔ)的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性，從而增加目標(biāo)基因的表達(dá)。

納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中的保護(hù)能力，在不久的將來(lái)可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。通過(guò)將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來(lái)修飾納米粒子，有助于改善它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸。將納米顆粒靶向到細(xì)胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過(guò)磁轉(zhuǎn)染來(lái)實(shí)現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑相比，使用納米顆粒轉(zhuǎn)染具有相當(dāng)?shù)男屎透偷募?xì)胞毒性，但仍需要證明以這種方式傳遞DNA會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)相似水平的基因表達(dá)，特別是考慮到該技術(shù)可能導(dǎo)致副作用。Severino et al.進(jìn)行的研究也指出了陽(yáng)離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。

質(zhì)子泵抑制劑可以通過(guò)基于從一個(gè)供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測(cè)量來(lái)評(píng)估，也可以通過(guò)化學(xué)測(cè)量來(lái)評(píng)估，在化學(xué)測(cè)量中，表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時(shí)通過(guò)適當(dāng)?shù)膱?bào)告系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個(gè)質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體，通過(guò)一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)連接，只有一個(gè)啟動(dòng)子。納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。江蘇轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。河北siRNA轉(zhuǎn)染試劑

基因注射包括通過(guò)注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細(xì)胞核中。當(dāng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性時(shí)，特別是當(dāng)需要對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾時(shí)，這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣，沒(méi)有一種方法可以適用于所有不同的細(xì)胞類型，選擇合適的細(xì)胞類型和核酸大小對(duì)于確保基因注射的成功至關(guān)重要。例如，先前的一項(xiàng)研究報(bào)道了成功生成表達(dá)cre重組酶(大小～1,000bp)的轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞系。另一方面，在一項(xiàng)體內(nèi)研究中，表達(dá)轉(zhuǎn)基因的小鼠肌纖維數(shù)量與注射次數(shù)和給藥質(zhì)粒劑量相關(guān)。另一項(xiàng)體外研究進(jìn)一步支持了這一觀點(diǎn)，該研究報(bào)道了表達(dá)報(bào)告基因的宿主細(xì)胞的數(shù)量與注入細(xì)胞的核酸量密切相關(guān)。此外，微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會(huì)影響基因注射的效率，因?yàn)橛袌?bào)道稱，涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質(zhì)層。河北siRNA轉(zhuǎn)染試劑