PLL(聚L -賴氨酸)是生理?xiàng)l件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長(zhǎng)超過20個(gè)殘基時(shí)，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價(jià)附著可通過受體介導(dǎo)的途徑***增強(qiáng)內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細(xì)胞上表達(dá)。當(dāng)ASOR共價(jià)附著在PLL上時(shí)，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細(xì)胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細(xì)胞中取得了實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA，并且在相同的多陽(yáng)離子/pDNA質(zhì)量比下，PLO/pDNA復(fù)合物比PLL/pDNA復(fù)合物更耐破壞。然而，由于其介導(dǎo)內(nèi)體逃逸的能力較差，帶正電的多氨基酸的轉(zhuǎn)染效率仍然很低。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級(jí)脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。遼寧轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細(xì)胞的過程。組合的一些例子包括多個(gè)質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ，以及多個(gè)miRNAs進(jìn)入同一個(gè)細(xì)胞。通常，多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞。其應(yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個(gè)例子是在HEK293細(xì)胞系中，用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外，多個(gè)質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系。遼寧轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究人員集中研究了將合成t細(xì)胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。

納米顆粒在疫苗遞送中往往表現(xiàn)出***的佐劑作用。陽(yáng)離子聚合物，包括PEI、聚賴氨酸、陽(yáng)離子葡聚糖和陽(yáng)離子明膠，已經(jīng)有報(bào)道顯示出對(duì)Th1反應(yīng)的強(qiáng)烈刺激，其特征是誘導(dǎo)CD4(+)T細(xì)胞增殖和th1相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。此外，陽(yáng)離子聚合物強(qiáng)烈抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分泌TNF-α。陽(yáng)離子聚合物的刺激能力與其陽(yáng)離子化程度有關(guān)，陽(yáng)離子聚合物與陰離子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也會(huì)影響其刺激能力，分子越大意味著刺激能力越大。

基因和RNAi***在臨床上的應(yīng)用需要安全高效的載體。迄今為止，核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關(guān)的安全問題有很多:誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)、不必要的突變和**。因此，在開發(fā)基于脂質(zhì)或聚合載體的非病毒載體是勢(shì)在必行的。1965年，Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖，這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年，F(xiàn)elgner引入了DOTMA，這是第一種用于DNA轉(zhuǎn)染的陽(yáng)離子脂質(zhì)。從那時(shí)起，大量不同的脂質(zhì)和聚合物被開發(fā)出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級(jí)脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。研究已經(jīng)確定了陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強(qiáng)了它們?cè)隗w內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的能力。

肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。幾項(xiàng)體內(nèi)研究表明，pDNA載體的肺內(nèi)遞送是促炎th1樣細(xì)胞因子的產(chǎn)生和隨后浸潤(rùn)細(xì)胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下，陽(yáng)離子脂質(zhì)本身不會(huì)引起免疫反應(yīng)，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內(nèi)***。在一項(xiàng)囊性纖維化臨床試驗(yàn)中，急性輕度流感樣癥狀被認(rèn)為是由DNA依賴效應(yīng)引起的，而對(duì)照組(*脂質(zhì)組)沒有觀察到這種效應(yīng)。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學(xué)或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠(yuǎn)離網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞，以及抑制內(nèi)粒體酸化。研究表明，系統(tǒng)地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導(dǎo)致體外小鼠脾細(xì)胞和靜脈注射或鼻內(nèi)滴注小鼠肺中細(xì)胞因子分泌減少。該方案還增加了轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平。利用肌內(nèi)注射等途徑，遠(yuǎn)離網(wǎng)狀上皮系統(tǒng)進(jìn)行被動(dòng)靶向，也能提高轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平。影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。遼寧轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個(gè)可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。遼寧轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

在一項(xiàng)將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到HUVEC中的研究中，使用包括Effectene和FuGENE 6在內(nèi)的非脂質(zhì)體試劑比脂質(zhì)體試劑DOTAP(18%)產(chǎn)生了更好的轉(zhuǎn)染效率(34%和33%)。在另一項(xiàng)用質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染HUVEC的研究中，與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質(zhì)體試劑(48小時(shí)時(shí)均<20%)相比，脂質(zhì)體試劑顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(Lipofectamine LTX在48小時(shí)時(shí)約為38%，Lipofectamine 2000在48小時(shí)時(shí)約為23%)。在這些研究中，基于脂質(zhì)體和非脂質(zhì)體的試劑轉(zhuǎn)染HUVECs的效率無法得出結(jié)論，主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而，一致的觀察結(jié)果表明轉(zhuǎn)染效率仍然存在無論使用何種試劑，低于40%無疑暗示原代細(xì)胞是一種難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型。遼寧轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)