肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內(nèi)研究表明，pDNA載體的肺內(nèi)遞送是促炎th1樣細胞因子的產(chǎn)生和隨后浸潤細胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下，陽離子脂質(zhì)本身不會引起免疫反應(yīng)，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內(nèi)***。在一項囊性纖維化臨床試驗中，急性輕度流感樣癥狀被認為是由DNA依賴效應(yīng)引起的，而對照組(*脂質(zhì)組)沒有觀察到這種效應(yīng)。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學(xué)或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠離網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細胞，以及抑制內(nèi)粒體酸化。研究表明，系統(tǒng)地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導(dǎo)致體外小鼠脾細胞和靜脈注射或鼻內(nèi)滴注小鼠肺中細胞因子分泌減少。該方案還增加了轉(zhuǎn)基因表達水平。利用肌內(nèi)注射等途徑，遠離網(wǎng)狀上皮系統(tǒng)進行被動靶向，也能提高轉(zhuǎn)基因表達水平。不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。湖北轉(zhuǎn)染試劑定做

小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質(zhì)粒來實現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結(jié)合以抑制熒光素酶的表達。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名，更具體地說，是轉(zhuǎn)錄后對特定基因表達的調(diào)控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統(tǒng)相關(guān)的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時共轉(zhuǎn)染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導(dǎo)致熒光素酶活性***降低。共轉(zhuǎn)染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對靶宿主細胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細胞類型中特定下游基因的表達，那么預(yù)計將其抑制劑序列同時轉(zhuǎn)染到同一細胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉(zhuǎn)染相比，涉及將多個核酸轉(zhuǎn)移到同一細胞中的共轉(zhuǎn)染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因為并非所有核酸類型都能有效轉(zhuǎn)移，這可能取決于轉(zhuǎn)染方法和所涉及的細胞類型。山東minic轉(zhuǎn)染試劑在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達相對短暫。

PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的，是***個用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中，PHP可以在不到兩個小時的時間內(nèi)失去其初始分子量的50%。然而，PHP完全分解為其等效單體需要三個月的時間，分解產(chǎn)物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨存在時降解很快，但與DNA絡(luò)合時更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復(fù)合物轉(zhuǎn)染CPAE細胞，測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉(zhuǎn)運聚合物，PHP酯的轉(zhuǎn)染效率與聚L-賴氨酸相當。轉(zhuǎn)染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉(zhuǎn)染細胞的能力不受FBS存在的影響。結(jié)果表明，PHP酯是一種潛在的基因載體。

在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對外源基因產(chǎn)物的新***抗體，(b)細胞因子介導(dǎo)的啟動子關(guān)閉，(c)通過凋亡、先天或適應(yīng)性免疫反應(yīng)根除表達細胞以及（d）表達基因的細胞因細胞凋亡而減少是導(dǎo)致表達減少。這些機制具有重要意義，因為不可能重復(fù)給藥，而且轉(zhuǎn)基因凈表達會隨著時間的推移而減少。盡管通過中和或消除細胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學(xué)病變，但肺部沒有不良反應(yīng)。這種增加可以通過使用較少的細胞毒性陽離子脂質(zhì)體（CLs）來控制。轉(zhuǎn)氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥嘌呤。影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。

化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質(zhì)，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞，因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率，如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細胞類型上，使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在同一項研究中，啟動子的類型也被認為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個因素，因此含有替代CMV啟動子的內(nèi)部啟動子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。其結(jié)構(gòu)的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團，這些基團被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。安徽西安轉(zhuǎn)染試劑

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。湖北轉(zhuǎn)染試劑定做

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動子、復(fù)制起點、多個克隆位點、目標基因和選擇標記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個克隆位點包含獨特的內(nèi)切酶切割位點，用于插入外源基因。適當?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細胞中表達。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。湖北轉(zhuǎn)染試劑定做