EndoS酶在抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）研究中的具體應(yīng)用主要體現(xiàn)在糖鏈定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)方面。根據(jù)上海藥物研究所的研究進(jìn)展，EndoS酶被用于實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)ADC化合物的“一步”制備，這是一種新穎的糖鏈定點(diǎn)ADC制備策略。該策略利用了新穎截短型糖結(jié)構(gòu)的藥物-連接子和野生型糖苷內(nèi)切酶EndoS2，將小分子細(xì)胞毒藥物直接定點(diǎn)連接到抗體糖基化位點(diǎn)，從而克服了傳統(tǒng)糖鏈定點(diǎn)ADC制備策略的限制。具體來說，研究人員通過篩選發(fā)現(xiàn)，EndoS2酶可以將二糖底物L(fēng)acNAc轉(zhuǎn)移至去糖抗體N297位糖基化位點(diǎn)，并且LacNAc半乳糖6號位唾液酸化修飾不影響EndoS2的轉(zhuǎn)糖基化活性。這一發(fā)現(xiàn)使得EndoS2和LacNAc的組合可以直接實(shí)現(xiàn)野生型抗體的糖基化改造，且EndoS2對多樣化LacNAc修飾的兼容性，可以高效獲得多樣性功能修飾的巖藻糖化或去巖藻糖化的糖工程抗體。此外，研究人員還利用疊氮化修飾的LacNAc底物實(shí)現(xiàn)了抗體糖基化位點(diǎn)的“一步”疊氮化修飾，并通過點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)偶聯(lián)藥物-連接子，實(shí)現(xiàn)了“兩步”制備得到定點(diǎn)ADC化合物。

蛋白在表達(dá)過程中形成包涵體，需要通過復(fù)性步驟恢復(fù)其活性。這通常涉及物質(zhì)的存在下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊。Bovine Fibrinogen 牛纖維蛋白原

轉(zhuǎn)座酶是一類能夠催化轉(zhuǎn)座子（一種可移動的DNA序列）在基因組中從一個(gè)位置移動到另一個(gè)位置的酶。轉(zhuǎn)座子可以在DNA分子上“跳躍”，在新的位置上插入自己的拷貝，而原始位置的轉(zhuǎn)座子則可能被切除或保留。轉(zhuǎn)座酶的作用是轉(zhuǎn)座過程中的關(guān)鍵因素，它們可以被分為兩類：1.**復(fù)制型轉(zhuǎn)座酶**：在復(fù)制型轉(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座子首先被復(fù)制，然后復(fù)制的拷貝到新的基因組位置，原始的轉(zhuǎn)座子留在原位。這種機(jī)制通常涉及到“復(fù)制-粘貼”的過程。2.**剪切型轉(zhuǎn)座酶**：在剪切型轉(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座子從原始位置被切除，然后到新的基因組位置。這涉及到“剪切-粘貼”的過程。轉(zhuǎn)座酶的活性和轉(zhuǎn)座子的移動可以對基因組的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要影響，包括：-**基因突變**：轉(zhuǎn)座子的插入可能破壞基因的正常功能，導(dǎo)致突變。-**基因組多樣性**：轉(zhuǎn)座活動增加了基因組的多樣性，有助于物種適應(yīng)環(huán)境變化。-**基因調(diào)控**：轉(zhuǎn)座子的插入可能激起或抑制某些基因的表達(dá)。-**新基因產(chǎn)生**：在某些情況下，轉(zhuǎn)座子的移動可以導(dǎo)致新基因的產(chǎn)生。

Recombinant Mouse ECSCR Protein,hFc Tag在CRISPR-Cas9等基因編輯技術(shù)中，使用Pfu DNA Polymerase進(jìn)行修復(fù)模板的合成。

酵母重組表達(dá)的PNGaseF（N-糖苷酶F）是一種用于蛋白質(zhì)去糖基化實(shí)驗(yàn)的酰胺水解酶，具有以下特點(diǎn)以確保實(shí)驗(yàn)中的活性和穩(wěn)定性：1.**高效性**：具有高比活性，例如750000U/mL，這有助于快速高效地進(jìn)行去糖基化反應(yīng)。2.**穩(wěn)定性**：在含有50%甘油的儲存緩沖液中，比較好的活性和穩(wěn)定性可維持長達(dá)24個(gè)月。3.**使用條件**：可以在原生或變性條件下使用，對于變性條件下的去糖基化，建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。4.**儲存條件**：建議在-15~-25℃保存，有效期1年。5.**酶活定義**：1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中，37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。6.**操作簡便**：提供了使用說明，包括變性和非變性條件下的蛋白質(zhì)去糖基化步驟。7.**His標(biāo)簽**：產(chǎn)品帶有His標(biāo)簽，便于在實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行純化和檢測。8.**純度**：純度達(dá)到95%以上，通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進(jìn)行確定。9.**快速反應(yīng)**：有些產(chǎn)品如FastPNGaseF，可以在數(shù)分鐘內(nèi)完成徹底且無偏好性地去糖基化。10.**注意事項(xiàng)**：產(chǎn)品供科研使用，操作時(shí)應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室防護(hù)裝備。遵循這些指導(dǎo)原則和產(chǎn)品說明，可以確保PNGaseF在實(shí)驗(yàn)中的活性和穩(wěn)定性，從而獲得可靠的去糖基化結(jié)果。

EndoS，即糖苷內(nèi)切酶S（Endo-S），是一種具有高度特異性的酶，它在生物化學(xué)研究中有著重要應(yīng)用，尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點(diǎn)：1.**特異性**：EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu)，即在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的連接處進(jìn)行切割。2.**應(yīng)用**：在制備糖鏈定點(diǎn)ADC化合物中，EndoS被用于將小分子細(xì)胞毒藥物“一步”定點(diǎn)連接到抗體糖基化位點(diǎn)，提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**：EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物，實(shí)現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**：EndoS的活性對多肽沒有嚴(yán)格的要求，可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是，對于具有三、四個(gè)支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，EndoS沒有活性。5.**產(chǎn)品形式**：EndoS通常以帶有His標(biāo)簽的形式存在，便于從反應(yīng)中去除，這在實(shí)驗(yàn)操作中提供了便利。6.**研究進(jìn)展**：EndoS在去糖基化方法研究中是一個(gè)重要的工具，特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時(shí)。

Phusion DNA Polymerase 應(yīng)在后面加入反應(yīng)體系中，以避免其3'-5'外切酶活性降解引物。

使用PreScissionProtease進(jìn)行蛋白質(zhì)切割時(shí)，為保證高純度和高活性，需要考慮以下關(guān)鍵因素：1.**特異性切割位點(diǎn)**：確保融合蛋白中包含PreScissionProtease特異性識別的序列，以實(shí)現(xiàn)精確切割。2.**酶與底物的比例**：適當(dāng)比例的酶量對于高效切割至關(guān)重要，過多或過少的酶都可能影響切割效率和純度。3.**反應(yīng)條件**：包括溫度、pH和反應(yīng)時(shí)間等，這些條件需要優(yōu)化以確保酶的活性和選擇性。通常，PreScissionProtease在4°C下進(jìn)行酶切。4.**緩沖液兼容性**：使用與PreScissionProtease兼容的緩沖液，避免使用可能抑制酶活性的離子或化學(xué)物質(zhì)。5.**蛋白濃度**：確保融合蛋白有足夠的濃度，以提高切割效率和減少樣品損失。6.**酶切后的分離**：切割后，需要有效分離目的蛋白和切割下來的標(biāo)簽，通常利用親和層析等方法。7.**避免蛋白降解**：在實(shí)驗(yàn)過程中添加蛋白酶抑制劑，以防止蛋白降解酶對目的蛋白的降解。8.**避免蛋白質(zhì)聚集**：在切割過程中，應(yīng)避免條件導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集或沉淀，這可能會影響純度和活性。9.**避免氧化**：在蛋白質(zhì)處理過程中，添加抗氧化劑如DTT或TCEP，以防止半胱氨酸殘基的氧化。10.**清潔的實(shí)驗(yàn)環(huán)境**：確保實(shí)驗(yàn)器材和環(huán)境的清潔，避免微生物污染和核酸污染。Pfu DNA Polymerase 具有3'-5'外切酶活性，能夠識別并切除錯(cuò)配的核苷酸，進(jìn)一步提高擴(kuò)增的準(zhǔn)確性。Recombinant Human DPPIV/CD26 (hFc Tag)

FnCas12a不僅可用于體外dsDNA的特異剪切，也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測，如HOLMES核酸快檢技術(shù)。Bovine Fibrinogen 牛纖維蛋白原

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是通過將ProteinA與Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合來構(gòu)建的。ProteinA是一種來源于金黃色葡萄球菌的蛋白質(zhì)，它具有高親和力結(jié)合大多數(shù)哺乳動物IgG抗體的Fc片段的能力。Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種能夠識別特定DNA序列并在基因組上進(jìn)行“剪切-粘貼”或“復(fù)制-粘貼”的酶。融合ProteinA的目的是為了在實(shí)驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)對特定蛋白質(zhì)的靶向。下面是pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶融合的一般步驟：1.**基因克隆**：首先，將Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一個(gè)表達(dá)載體中。這通常涉及到分子克隆技術(shù)，如PCR擴(kuò)增、限制性內(nèi)切酶消化和連接酶連接。2.**融合蛋白設(shè)計(jì)**：設(shè)計(jì)一個(gè)融合蛋白，其中ProteinA的基因序列和Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因序列通過一個(gè)短的連接肽（linkerPeptide）相連。這個(gè)連接肽通常包含幾個(gè)氨基酸殘基，以確保兩個(gè)蛋白部分在融合后仍能保持各自的構(gòu)象和功能。3.**表達(dá)載體構(gòu)建**：將融合基因插入到適合的表達(dá)載體中，這個(gè)載體應(yīng)該包含適當(dāng)?shù)膯幼印?biāo)記基因（如抗性基因）和終止子，以確保融合蛋白在宿主細(xì)胞中得到高效表達(dá)。4.**宿主細(xì)胞表達(dá)**：將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞（如大腸桿菌）中，通過誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白。Bovine Fibrinogen 牛纖維蛋白原