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PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)及建設(shè)要求:PCR實(shí)驗(yàn)指的是基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,例如:乙型,禽疫病、檢測(cè),癌基因的檢測(cè)和診斷,個(gè)體識(shí)別,DNA指紋,及法醫(yī)物證等等。
PCR實(shí)驗(yàn)室布局:PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為:①試劑準(zhǔn)備區(qū);②樣品制備區(qū);③擴(kuò)增區(qū);④擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),共四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域。并設(shè)有走廊,山西太原PCR實(shí)驗(yàn)室工程,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。
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PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的幾個(gè)注意事項(xiàng):標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分隔和氣流控制:標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分隔:試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備、PCR擴(kuò)增檢測(cè)和擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)四個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)。每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),空氣壓力嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)逐漸遞減方式進(jìn)行,防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。
消毒:在4個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和4個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)紫外線燈,對(duì)實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。
機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗:試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,方便實(shí)驗(yàn)室工作人員傳遞物品又可減少實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)出實(shí)驗(yàn),確保試劑和標(biāo)本在傳遞過(guò)程中不受污染室。
地面:室內(nèi)地面建議使用PVC材質(zhì)地面,具有耐腐蝕,耐磨損,平整度好,并且容易清掃。地角線用陰角鋁裝飾,嚴(yán)密性好且美觀。
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PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備:試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進(jìn)行試劑的制備,分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)域。
樣品制備區(qū):主要進(jìn)行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。 本區(qū)主要設(shè)備有冰箱,生物安全柜,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,壓力一般設(shè)計(jì)為 10Pa。
擴(kuò)增區(qū):主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增項(xiàng)目。已制備的DNA模板(來(lái)自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有:冰箱,加樣器,離心機(jī),擴(kuò)增儀等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶從本區(qū)漏出,壓力一般設(shè)計(jì)為-25Pa。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):主要進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。本區(qū)主要設(shè)備有加樣器,、和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域,壓力一般設(shè)計(jì)為-25Pa。
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