脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過(guò)在腎細(xì)胞中添加魚(yú)精蛋白，設(shè)法提高了固體脂質(zhì)納米顆粒的轉(zhuǎn)染效率，但與不添加魚(yú)精蛋白的對(duì)照組相比，相同的多功能單元，DNA/魚(yú)精蛋白/SLN(固體脂質(zhì)納米顆粒)，降低了HEK 293細(xì)胞系(人胚胎腎細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率。這給了我們希望，通過(guò)加入必要的配體的可能性，使用納米顆粒的轉(zhuǎn)染可能會(huì)調(diào)整到給定的細(xì)胞類(lèi)型。Bahrami et al.經(jīng)表明，不同種類(lèi)的納米顆粒以不同的方式與細(xì)胞膜結(jié)合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀，也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進(jìn)入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實(shí)驗(yàn)表明，納米顆粒的大小對(duì)COS-1(非洲綠猴腎細(xì)胞)和HEK 293細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時(shí)，轉(zhuǎn)染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中，小顆粒和大顆粒的細(xì)胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的，這表明使用納米顆粒進(jìn)行基因傳遞的效率受到許多因素的影響，它們的使用應(yīng)該根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和應(yīng)用條件進(jìn)行具體調(diào)整。此外，用作納米顆粒分散劑的不同物質(zhì)，如十六種不同類(lèi)型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白，對(duì)其在溶液中的團(tuán)聚有***影響。納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中的保護(hù)能力，在不久的將來(lái)可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。浙江轉(zhuǎn)染試劑定做

脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過(guò)網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來(lái)，進(jìn)入核周區(qū)域，***進(jìn)入細(xì)胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明，很大一部分從核內(nèi)體釋放到細(xì)胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細(xì)胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結(jié)合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉(zhuǎn)染所觀察到的低且可變的轉(zhuǎn)染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細(xì)胞外部到細(xì)胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項(xiàng)驚人的壯舉。至少對(duì)于質(zhì)粒而言，較小的結(jié)構(gòu)體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉(zhuǎn)染率。核酸外排，雖然不是常見(jiàn)的報(bào)道，但也被證明會(huì)發(fā)生。遼寧廣州轉(zhuǎn)染試劑化學(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。

質(zhì)子泵抑制劑可以通過(guò)基于從一個(gè)供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測(cè)量來(lái)評(píng)估，也可以通過(guò)化學(xué)測(cè)量來(lái)評(píng)估，在化學(xué)測(cè)量中，表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時(shí)通過(guò)適當(dāng)?shù)膱?bào)告系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)。后一種基于熒光素酶的方法被稱(chēng)為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個(gè)質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體，通過(guò)一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)連接，只有一個(gè)啟動(dòng)子。

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過(guò)病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動(dòng)子、復(fù)制起點(diǎn)、多個(gè)克隆位點(diǎn)、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個(gè)克隆位點(diǎn)包含獨(dú)特的內(nèi)切酶切割位點(diǎn)，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛?dòng)子(如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會(huì)產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。陽(yáng)離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。

共轉(zhuǎn)染是將一種以上類(lèi)型的核酸引入真核細(xì)胞的過(guò)程。組合的一些例子包括多個(gè)質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ，以及多個(gè)miRNAs進(jìn)入同一個(gè)細(xì)胞。通常，多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞。其應(yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個(gè)例子是在HEK293細(xì)胞系中，用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外，多個(gè)質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系。deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類(lèi)似物。四川長(zhǎng)沙轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。浙江轉(zhuǎn)染試劑定做

基因注射包括通過(guò)注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細(xì)胞核中。當(dāng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性時(shí)，特別是當(dāng)需要對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾時(shí)，這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣，沒(méi)有一種方法可以適用于所有不同的細(xì)胞類(lèi)型，選擇合適的細(xì)胞類(lèi)型和核酸大小對(duì)于確?；蜃⑸涞某晒χ陵P(guān)重要。例如，先前的一項(xiàng)研究報(bào)道了成功生成表達(dá)cre重組酶(大小～1,000bp)的轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞系。另一方面，在一項(xiàng)體內(nèi)研究中，表達(dá)轉(zhuǎn)基因的小鼠肌纖維數(shù)量與注射次數(shù)和給藥質(zhì)粒劑量相關(guān)。另一項(xiàng)體外研究進(jìn)一步支持了這一觀點(diǎn)，該研究報(bào)道了表達(dá)報(bào)告基因的宿主細(xì)胞的數(shù)量與注入細(xì)胞的核酸量密切相關(guān)。此外，微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會(huì)影響基因注射的效率，因?yàn)橛袌?bào)道稱(chēng)，涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質(zhì)層。浙江轉(zhuǎn)染試劑定做