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分光光度計(jì)的工作原理
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分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,微量紫外分光光度計(jì),光線透過測(cè)試的樣品后,部分光線被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(zhǎng)度)成正比,其關(guān)系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I0為入射的單色光強(qiáng)度;
I 為透射的單色光強(qiáng)度;
T 為物質(zhì)的透射率;
k 為摩爾吸收系數(shù);
L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長(zhǎng);
c 為物質(zhì)的濃度;
1)1900型等分光光度計(jì),由于其光電接收裝置為光電倍增管,它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大,因而可以用于檢測(cè)微弱光電信號(hào),微量紫外分光光度計(jì)哪家好,而不能用來檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移,靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn),在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,因此在預(yù)熱時(shí),應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿,避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
2)放大器靈敏度換擋后,必須重新調(diào)零。
3)比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用,否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法如下;分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液,把儀器置于某一波長(zhǎng)處,石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水,玻璃比色杯:700nm處裝蒸餾水,微量紫外分光光度計(jì)報(bào)價(jià),將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至,測(cè)量其他各池的透射比值,記錄其示值之差及通光方向,如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用,若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。
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分光光度計(jì)的技術(shù)參數(shù)
波長(zhǎng)范圍:320∽1000nm
光譜帶寬:4nm
雜散光:≤0.5%(在360nm處)
波長(zhǎng)準(zhǔn)確度:優(yōu)于±2nm
透射比準(zhǔn)確度:≤±1nmT
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