PCR實驗室的設(shè)計原則

使用實時熒光PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；

采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。

PCR實驗室工作基本原則

1.進入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進行

試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

由于擴增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對（bp），對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間，好是照射過夜。

實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產(chǎn)物時，必須使用洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實驗室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實驗室的地方棄掉。

PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流、物流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免實驗之間的相互干擾，防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。

PCR實驗室的設(shè)計原則

原則上應(yīng)當(dāng)設(shè)置4個區(qū)域：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。

PCR實驗室注意事項

試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。PCR實驗室沒有嚴(yán)格的凈化要求，可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

樣品制備區(qū)：主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。