低溫生物菌種的防護(hù)方法有哪些？

       主要的方法是：①用添加劑和速凍，以防止冰晶的形成，即使形成，也是微小的冰晶，不致引起機(jī)械損傷。常用的添加劑是甘油和某些多元醇類化合物如甘醇等，其作用是使水不易結(jié)冰。速凍是將生物體在很短時(shí)間內(nèi)，立即降至液態(tài)氮的溫度（約為-195℃），使水迅速凝固，以避免形成冰晶。只用添加劑不能完全防止結(jié)冰；單靠速凍雖能避免在降溫時(shí)形成較大的冰晶，卻不能避免在溫度回升時(shí)形成較大冰晶。只有兩者適當(dāng)結(jié)合，才能避免低溫對(duì)生物體的損傷；②冷凍干燥，即在凝固狀態(tài)下，依靠真空干燥使水分升華，以防止因速冷而凝固的液體在溫度回升時(shí)又形成冰晶。生物樣品經(jīng)冷凍干燥后在常溫下即可儲(chǔ)存，是一種較為理想的保存方法。但這種方法在溫度過低時(shí)， 升華過慢， 溫度偏高時(shí)又很難避免冰晶的形成，而且完全脫水也會(huì)給復(fù)雜的生物體帶來某些不可恢復(fù)的損傷。因此只用于保存生物制品乳品、食品，以及菌種和病毒(見菌種保藏)等。

                                                  低溫生物菌種保藏有雙重“保險(xiǎn)”

作為我國可同時(shí)提供一般菌種資源服務(wù)和專利生物材料保存的保藏中心，保藏中心于1995年被列入“布達(dá)佩斯條約國際保藏單位”，成為一個(gè)持有國際牌照的微生物“銀行”。

“這里主要是收集、保藏、鑒定、交換和供應(yīng)各類生物材料。”一些研發(fā)中分離出的菌種，暫時(shí)不知道有什么功能，就作為資源儲(chǔ)備儲(chǔ)存；而研究課題需要收集、篩選的菌類，結(jié)題后也可存放備份。幾十年來，保藏中心共提供了幾十萬株各類微生物菌種，在我國生命科學(xué)和生物技術(shù)研發(fā)中貢獻(xiàn)。

                                                       低溫生物菌種貯存的方式

1.冷凍真空干燥法。將已培養(yǎng)、生長(zhǎng)豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的、卵白、脫脂奶制成菌懸液，將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5毫升，然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接，安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍，并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥，并在真空狀態(tài)下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本較高。

     2.液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用；其次，準(zhǔn)備安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷凍保護(hù)劑10%（體積比）甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌（1公斤/平方厘米，5分鐘）。無菌檢查后，接入要保藏的菌種，火焰熔封瓶口，檢查是否漏氣，將封好口的安瓿瓶放在凍結(jié)器內(nèi)，以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫，使保藏品逐步均勻地凍結(jié)，直至-35℃，以后凍結(jié)速度就不需控制，安瓿凍結(jié)后立即放入液氮罐內(nèi)，在-150至-196℃保藏，該法只有少數(shù)科研院所使用。