液相色譜的分離過(guò)程

同其他色譜過(guò)程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過(guò)程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

開(kāi)始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A、B和C，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開(kāi)始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時(shí)間長(zhǎng)，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間，第二個(gè)流出色譜柱。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達(dá)到分離之目的。

不同組分在色譜過(guò)程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問(wèn)題，也是分離的首要條件。

其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長(zhǎng)展寬，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān)。所以分離效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。

液相色譜儀分類

      液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動(dòng)相分離過(guò)程的物理化學(xué)原理，可分為以下五種。

　　1、吸附色譜：

　　用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。

　　2、分配色譜：

　　用載帶在固相基體上的固定液作固定相，以不同極性溶質(zhì)作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動(dòng)相相對(duì)極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當(dāng)固定相的極性大于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為正相分配色譜或簡(jiǎn)稱正相色譜;若固定相的極性小于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為反相分配色譜或簡(jiǎn)稱反相色譜。

3、離子色譜：

　　用微粒離子交換劑作固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。

　　4、體積排阻色譜：

　　用化學(xué)惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對(duì)樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。以水溶液作流動(dòng)相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過(guò)濾色譜;以有作流動(dòng)相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。

　　5、親和色譜：

　　以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實(shí)現(xiàn)對(duì)具有生物活性的生物分子的分離。

液相色譜法

色譜法的創(chuàng)始人是俄國(guó)的植物學(xué)家茨維特（ M.Tswett）。1906年，俄國(guó)植物學(xué)家茨維特發(fā)表了他的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：為了分離植物色素，他將含有植物色素的石油的醚提取液倒入裝有碳酸鈣粉末的玻璃管中，并用石油的醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸鈣顆粒表面的吸附力不同，隨著淋洗的進(jìn)行，不同色素向下移動(dòng)的速度不同，從而形成一圈圈不同顏色的色帶，使各色素成分得到了分離。他將這種分離方法命名為色譜法(chromatography)。