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Tris通常被用于核酸DNA或RNA的瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液,通常用的緩沖體系有TAE、TBE、TPE等,即生物緩沖劑Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的緩沖溶液。不同公司使用的緩沖液有所差異,相對來說使用磷酸的TPE較少,主要是使用TAE和TBE緩沖液。在做核酸瓊脂糖凝膠電泳時,首先的準(zhǔn)備工作就是制備凝膠,瓊脂糖凝膠做的好壞直接影響電泳效果和效率。這個制作過程耗時較長,節(jié)約時間考慮也可以直接購買制備好的預(yù)制凝膠。
緩沖溶液的作用是在有限的范圍內(nèi)調(diào)整溶液的pH值使待測溶液的酸度符合分析方法所規(guī)定的范圍,例如,在堿性介質(zhì)及鐵存在下,可與4-氨基安替比林反應(yīng)生成橙紅色的安替比林染料,為了防止芳香胺類的干擾以pH在10士0.2時為適宜。為此,就需要在待測溶液中加入氨一氯化錢緩沖溶液調(diào)整和控制待測溶液的pH為10.0士0.2。
三羥(Tris)是一種應(yīng)用非常廣泛的有機試劑,它的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。它及其衍生物被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實驗中的緩沖液的制備,可用于制作、有機合成、生物緩沖劑等。其中在生化實驗中,許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實驗都需要用Tris作為生物緩沖劑。它甚至有超過磷酸鹽緩沖液的趨勢,本文將對其衍生緩沖液進行簡述。
后,可以通過添加一些穩(wěn)定劑到蛋白純化緩沖液中,以幫助提高蛋白純化時的溶解度和穩(wěn)定性。在緩沖液中添加惰性蛋白BSA某種程度可以穩(wěn)定蛋白,但必須確保這些加入的穩(wěn)定蛋白不干擾實驗。有時添加甘油、聚乙二醇等添加劑可以增加緩沖液粘度,有助于防止蛋白聚集。另外,使用少量的表面活性劑和一些離子化合物如硫酸鹽、氨基酸、檸檬酸等可以屏蔽蛋白間的離子相互作用,幫助蛋白溶解。