等溫核酸試劑盒

FAQ

1 RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎?

可以。RPA技術(shù)支持在同一個管中同時進(jìn)行多個擴(kuò)增反應(yīng)。不過，多重化的引物組合需要精心設(shè)計，以便每個引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)不要超標(biāo)太多。如果在一個反應(yīng)中使用兩個以上的擴(kuò)增引物，就應(yīng)該控制不同引物的量。另外，我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測多個擴(kuò)增事件的探針、設(shè)備以及熒光團(tuán)的兼容性。

核酸試劑盒

英國TwistDx 公司（前身為ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過突破等溫DNA擴(kuò)增，開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA),被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白(SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

RPA反應(yīng)的適宜溫度在37℃~42℃之間，無需變性，常溫下即可反應(yīng)，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?/span>（尤其是DNA）模板擴(kuò)增到可檢出水平，從單個模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。無需復(fù)雜樣品處理，即可實(shí)地檢測；既可擴(kuò)增DNA也可擴(kuò)增RNA，省去額外的cDNA合成步驟；檢測方式多樣：終點(diǎn)檢測、對擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時監(jiān)控或通過側(cè)流層析試紙條（LFD）讀取結(jié)果。

試劑盒包括兩類：①.TwistAmp凍干研發(fā)試劑盒（包括TwistAmp Basic試劑盒、TwistAmp exo 試劑盒和TwistAmp nfo 試劑盒共三種）；②. TwistAmp液態(tài)研發(fā)試劑盒（包括TwistAmp Liquid Basic 試劑盒和TwistAmp Liquid exo 試劑盒共兩種）

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目前，核酸檢測方法主要包括PCR法、恒溫擴(kuò)增法、測序法、CRISPR檢測法等。其中，第二代PCR技術(shù)是病毒檢測方法的主流方法，也是目前認(rèn)可的SARS-CoV-2測定方法。第二代PCR技術(shù)，又稱熒光PCR法，是指在反應(yīng)體系中加入了熒光物質(zhì)，通過專門儀器實(shí)現(xiàn)實(shí)時熒光檢測，并對模板進(jìn)行定量計算。為了增加靈敏度和特異性，熒光PCR法出現(xiàn)了不少改進(jìn)版本，包括Taqman探針法、雙重或多重?zé)晒釶CR等。