武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學技術服務、技術咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術服務企業(yè)。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國博士創(chuàng)辦?；驑孏DS-80轟擊時氦氣罐的氣壓為1300psi，取10μLDNA包裹好的微粒懸浮液加到基因槍中央，進行轟擊，之后放置25℃避光過夜培養(yǎng)，使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。公司長期致力于建立并完善多項基礎生物技術服務平臺?，F(xiàn)憑借自身技術特色，依托光谷生物城技術產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢，面向全國提供生物技術服務。

蛋白分布在細胞中的各個位置，其中蛋白豐度高，種類豐富的研究比較深入。定位注釋結果準確的區(qū)域有細胞核，原生質(zhì)體，線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等，植物還有葉綠體和液泡。注意:1、不建議將爬片泡酸后高壓滅菌，首先玻片太薄高壓容易使玻片變形，其次濕滅很容易使玻片上留下水漬影響細胞貼壁。而對于定位在細胞膜，分泌蛋白或者定位在多個區(qū)域的蛋白來說，其亞細胞定位預測信息一般準確性較低。

通過對目的蛋白的標記，例如融合綠色熒光蛋白GFP，使用掃描共聚焦顯微鏡激發(fā)熒光，從而對蛋白的表達分布予以確認。依據(jù)對亞細胞分布的準確度不同，亞細胞定位的實驗設計也分成簡化型亞細胞定位分析和內(nèi)參型共定位分析。以單細胞RNA-seq技術為基礎的轉(zhuǎn)錄組學分析技術的革命性提升，實現(xiàn)了單細胞內(nèi)部數(shù)以千萬個轉(zhuǎn)錄本的同時檢測，完整地勾勒出各細胞活動之間的動態(tài)關聯(lián)。對于植物蛋白的亞細胞定位分析，主要通過構建融合熒光蛋白的過表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化煙1草和原生質(zhì)體瞬時表達體系確定其定位及共定位情況。

原理：構建編碼目bai標蛋白和熒光蛋du白的融合蛋白的載體，轉(zhuǎn)染細胞，表zhi達，然后激光共聚焦顯微鏡dao觀察熒光信號所在位置，即可知道該蛋白的亞細胞定位。注意做空載熒光蛋白的對照。

具體步驟：構建目標蛋白與GFP的融合蛋白的瞬時表達載體，基因槍轟擊洋蔥內(nèi)表皮細胞，或化學（PEG）轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體，瞬時表達后用熒光顯微鏡觀察熒光位置，當然激光共聚焦圖片會更漂亮。