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蛋白質(zhì)結(jié)晶方法
液-液擴散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中,蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個有小孔的毛細管中,一個測熔點用的毛細管一般即可(如圖1.2)。下層是密度大的溶液,例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑,它會在上層。以1:1混合,沉淀劑的濃度應(yīng)該是所期終濃度的二倍。兩種溶液(各自約5μl)通過針頭導入毛細管,先導入下層的。通過一個簡易的搖擺式離心機去除氣泡。再加入上層,進而兩層之間形成一個明顯的界面,它們會逐漸彼此擴散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno(1994)已經(jīng)發(fā)展液-液擴散技術(shù)至法。蛋白質(zhì)溶液通過毛細力被吸入狹窄的管中,管的一端是封閉的。接著,開放端入置于小容器的凝膠中,凝膠使得管豎直,蛋白質(zhì)溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上,整個裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過凝膠和毛細管的擴散時間可以由毛細管插入凝膠的深度控制,從而蛋白質(zhì)溶液中即可形成過飽和區(qū)域,毛細管底部高而頂部低。這也可作為一個篩選佳結(jié)晶條件的額外信息。
蛋白結(jié)晶板方法
用于人工和高通量蛋白晶體生長以及其他生物或有機晶體生長的設(shè)備和方法.一微孔板包含多個單元格,以及一限定微孔板中單元格的邊框.在每個單元格中至少存在一個上部開口的孔.單元格中的每個孔底部可以封閉,或者其底部是開口的,但孔底部由一獨立部件封閉,其可以為獨立的膜或板(例如塑料,玻璃或金屬)或一模制部件。
蛋白質(zhì)晶體板介紹
研究蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)的物理化學分支學科。蛋白質(zhì)分子是由上百或更多的α-氨基酸作為單體縮合而成的多肽(見肽)鏈構(gòu)成的。能構(gòu)成蛋白質(zhì)中多肽鏈的α-氨基酸總共有 20種L-氨基酸。通過它們不同的組合和排列形成氨基酸順序不同的多肽鏈,然后這些多肽鏈進一步通過交聯(lián)構(gòu)成千萬種蛋白質(zhì)分子。多肽鏈的氨基酸順序及其交聯(lián)的位置代表蛋白質(zhì)分子的一級結(jié)構(gòu)。在一級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,蛋白質(zhì)分子中的多肽鏈按一定的方式在空間分布,形成二級和三級立體結(jié)構(gòu)等。-氨基酸、 多肽鏈和二硫橋蛋白質(zhì)分子是一個由α-氨基酸單體相互縮合而成的多肽分子。其中每個氨基酸縮合后殘留的部分稱為氨基酸殘基。
蛋白結(jié)晶板
蛋白質(zhì)分子的三維結(jié)構(gòu)是生命科學研究中極為重要的信息,X射線單晶衍射技術(shù)是目前獲得結(jié)構(gòu)信息的手段,但如何篩選到個蛋白晶體是該技術(shù)必需的步,也是制約結(jié)構(gòu)生物學發(fā)展的主要瓶頸問題之一.現(xiàn)在一般通過規(guī)模篩選的方法從眾多的溶液中篩選出可結(jié)晶的條件,但是工作量較大,效率也不高.回顧了近年來在提高結(jié)晶篩選效率方向取得的成就。