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微球表面,即使帶有磺酸基和羧基等親水基團(tuán)的微球表面,均可與生物分子,包括蛋白、短肽、和其它小分子,發(fā)生疏水(被動(dòng))吸附。
上述的物理吸附隨著蛋白分子量的增大而升高。聚苯乙烯微球表面大多數(shù)是C—C鍵、C—H鍵等疏水分子鏈形成的區(qū)域構(gòu)成的。這些區(qū)域可與生物分子的疏水區(qū)域形成物理吸附作用。蛋白與微球通過多點(diǎn)吸附的方式與這些區(qū)域相互作用,在混合蛋白溶液中,大分子蛋白會(huì)優(yōu)先吸附到微球表面。
在蛋白質(zhì)混合液的包被中,分子量大的蛋白,會(huì)優(yōu)先被吸附到微球表面。在佳的pH下,將微球和蛋白混合在一起,微球很容易對類似于這類物質(zhì)的進(jìn)行特異性吸附,然后通過離心等方法,可將未交聯(lián)的蛋白除去。
表面功能化的微球可以和蛋白質(zhì)(或其它生物分子)發(fā)生共價(jià)偶聯(lián),從而實(shí)現(xiàn)微球與蛋白質(zhì)(或其它生物分子)的共價(jià)結(jié)合。
羧基修飾微球經(jīng)過EDC/NHS活化之后,很容易與蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。值得注意的是,這些微球在高濃度的電解質(zhì)(高達(dá)1 M的一價(jià)鹽)中更加的穩(wěn)定。
粒子上的包被量,直接關(guān)系到包被結(jié)果及成本。如果包被量太低,則有可能不利于大程度上捕獲抗原;如果包被量太高,則有可能不利于節(jié)省成本,甚至可能過于“擁擠”而使部分失去活性。一般而言,我們建議每100 mg的微球,包被5~30 mg的蛋白不等。大微球比表面積小,包被蛋白的量較少;小微球比表面積大,包被蛋白的量較多。每個(gè)項(xiàng)目不一樣、每個(gè)廠家的來源有差異,具體的包被量,仍需按照實(shí)驗(yàn)結(jié)果摸索。