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在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過程中要考慮使用環(huán)境。且來看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發(fā)揮它的潛能的。因?yàn)門ris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。需要注意的是THAM緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1,而且易吸收CO2所以需要密封。THAM主要就是用于生物緩沖劑的,與用于的緩血酸胺有差異,需要加以區(qū)別。
Tris試劑桶裝,在病毒保存液中,加入Tris首先可以維持采樣樣本的pH值,起到生物緩沖劑的效果,病毒及其核酸對(duì)環(huán)境pH是比較敏感的,核酸(DNA、RNA)在酸性溶液中易水解,在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。而Tris三羥,PH緩沖范圍:7.0-9.0,能夠維持待提取樣品裂解后釋放的核酸的穩(wěn)定性,以避免核酸的降解,提高核酸的濃度和純度,有利于提高核酸的質(zhì)量,保證后續(xù)核酸檢測(cè)分析等操作的準(zhǔn)確性。
Tris緩沖液是在生物化學(xué)研究中使用較廣泛的一種緩沖劑,其本身為弱堿,常用有效pH在“中性”范圍,Tris-HCl緩沖液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸鹽緩沖液:pH=5.0~9.0。
Tris-HCl緩沖液優(yōu)點(diǎn)
堿性較強(qiáng),可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的范圍pH緩沖液;
對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
Tris-HCl緩沖液缺點(diǎn)
pH受濃度影響較大,稀釋10倍,pH變化大于0.1
溫度效應(yīng)大,如4℃時(shí)pH=8.4,37℃時(shí)pH=7.4
易吸收空氣中的二氧化碳
對(duì)某些pH電極有一定干擾作用,要使用與Tris溶液具有兼容性的電極
常用貯液與溶液
1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾。