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液相色譜柱清洗方法

gao效液相色譜是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測定的重要手段。具體平衡方式也很簡單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、及臨床分析。gao效液相色譜柱是消耗品，會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加，出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行徹底清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：

1、反相色譜柱

分別用jia醇:水=90:10，純jia醇（HPLC級(jí)），異bing醇（HPLC級(jí)），二氯jia烷（HPLC級(jí)）等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。

2、正相色譜柱

分別用正己烷（HPLC級(jí)），異bing醇（HPLC級(jí)），二氯jia烷（HPLC級(jí)），jia醇（HPLC級(jí)）等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異bing醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用jia醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

3、離子交換色譜柱

長時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。

lux （手性色譜柱）

完整的手性分離方案

從分析到制備級(jí)別，簡化手性分離，均是明智的投入！

LUX手性柱和填料通過以下三種方法簡化分離過程：

?獨(dú)特和傳統(tǒng)的固定相相結(jié)合，增加手性篩選的成功率

?完全兼容于正相體系、極性有機(jī)相體系、超臨界流體

?色譜及反相體系的方法-無需換柱！

使用Lux?篩選工具包

可以分離92%*的對映體

現(xiàn)有5種獨(dú)特的固定相可選擇！

1.Amylose-2:獨(dú)特的氯代固定相擴(kuò)大了對映體選擇性范圍；

2.Cellulose-2:新型氯代固定相提高您手性篩選的成功率；

廣州聯(lián)方實(shí)驗(yàn)器材有限公司主營：液相色譜柱，Kinetex色譜柱，Gemini色譜柱，Synergi色譜柱，Luna色譜柱等等。我們不斷追求，通過自身的不斷完善，可以為您提供實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)需要的玻璃耗材、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、實(shí)驗(yàn)器材、色譜耗材和生物耗材，是quan面的實(shí)驗(yàn)室一體化采購平臺(tái)。涂覆型三ben甲酸酯纖維素手性色譜柱(COB柱)，適用于脂肪族和芳香族小分子化合物的拆分。我們本著嚴(yán)謹(jǐn)、務(wù)實(shí)、創(chuàng)新的創(chuàng)業(yè)精神，為您提供價(jià)格優(yōu)惠、質(zhì)量保證的產(chǎn)品。我們有及時(shí)的送貨服務(wù)，準(zhǔn)確而快捷地滿足您的需要。

如何避免液相色譜柱的損壞呢？

在gao效液相色譜的使用中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室會(huì)面臨色譜柱頻繁損壞的問題。

曾經(jīng)也有很多同學(xué)和我聯(lián)系討論色譜柱的清洗和再生，所以我之前寫了一篇關(guān)于色譜柱的清洗欠你們的色譜柱清洗再生方法來了）。

但是轉(zhuǎn)念一想，其實(shí)應(yīng)該幫助大家做的事情是如何去避免色譜柱的損壞。所以，這次我們就來討論一下色譜柱的預(yù)防吧。

損壞的來源

首先，需要來了解一下色譜柱的損壞來源于哪些方面：

泵頭密封圈的磨損

進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子密封圈的磨損

析出的緩沖鹽

樣品中的復(fù)雜易吸附基質(zhì)

其實(shí)，在工作過程中大多數(shù)的顆粒物堵塞導(dǎo)致的色譜柱背壓升高問題是體現(xiàn)在柱頭堵塞。

而樣品的易吸附機(jī)制也可能會(huì)和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導(dǎo)致色譜柱背壓升高。

但是這種情況在較低的PH系統(tǒng)中會(huì)有所改善，因?yàn)檩^低的PH系統(tǒng)會(huì)降低硅膠表面的硅醇基發(fā)生解離。

預(yù)防措施

為了降低色譜柱的損傷問題，我建議大家在使用色譜柱時(shí)可以做一些預(yù)防。例如：

1在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器

在線過濾器的內(nèi)部顆粒空隙一般是0.5微米，對于UHPLC會(huì)選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個(gè)空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。

不同公司的在線過濾器

所以，在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動(dòng)進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物，以防止柱頭過濾篩板的堵塞。

注意：但是對于非常低死體積的液相系統(tǒng)，在線過濾器的加入可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)死體積增大峰展寬變嚴(yán)重的問題。而對于大多數(shù)的液相系統(tǒng)而言，色譜圖不會(huì)有太大變化。

LuxAMP 手性液相色譜柱

出眾的可靠性

Luna 3μm AMP 填料和色譜柱均具有非常高的一致性，這使它們能夠成為ben丙胺和jia基ben丙胺分析的準(zhǔn)確分析工具。通過 LC-MS 分析ben丙胺和jia基ben丙胺對每批產(chǎn)品進(jìn)行專門測試，經(jīng)過

質(zhì)量測試的色譜柱能夠確保可靠性和重現(xiàn)性。

如果 Lux 分析柱（內(nèi)徑≤ 4.6mm）不能提供與具有相同粒徑、類似固定相和規(guī)格的同類色譜柱至少相當(dāng)或更好的手性分離效果，請?jiān)?45 天內(nèi)提供對比數(shù)據(jù)并退回產(chǎn)品，我們將為您全額退款。

廣州聯(lián)方實(shí)驗(yàn)器材有限公司成立于2005年，位于廣州番禺區(qū)，是集技術(shù)和銷售于一體的企業(yè)。聯(lián)方的創(chuàng)始人在美國紐約留學(xué)，歸國創(chuàng)立了聯(lián)方。公司主營：液相色譜柱，Kinetex色譜柱，Gemini色譜柱，Synergi色譜柱，Luna色譜柱等等。當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí),則過濾是必要的,如前所述,當(dāng)緩沖溶液放置一段時(shí)間(視環(huán)境溫度不同而異,夏季一般不超過48h,冬季一般不超過一周)后,在使用前還應(yīng)重新過濾。我們的服務(wù)范圍：1、 亞速旺廣州代理。2、 美國精騏有限公司廣州一級(jí)代理。3、 丹麥CAPP、波蘭RADWAG合作伙伴。4、 博納艾杰爾、美國飛諾美Phenomenex廣東代理。5、 代理環(huán)凱、BD、梅里埃等微生物試劑。6、 提供國產(chǎn)和進(jìn)口的玻璃、色譜耗材，3M、杜邦等防護(hù)產(chǎn)品。7、 代理中檢所、計(jì)量院、USP、TRC、DR、ES、Bepure、first standard。8、 定制各種實(shí)驗(yàn)分析檢測玻璃裝置，定制各種實(shí)驗(yàn)異形裝置。

液相色譜儀的選擇

液相色譜儀基質(zhì)的選擇大致遵循以下法則，硅膠基質(zhì)的填料被用于大部分的HPLC分析，尤其是小分子量的被分析物，聚合物填料用于大分子量的被分析物質(zhì)，主要用來制成分子排阻和離子交換柱。

色譜柱在使用前，z好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。色譜柱在使用前，z好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是z佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。

廣州聯(lián)方實(shí)驗(yàn)器材有限公司成立于2005年，位于廣州番禺區(qū)，是集技術(shù)和銷售于一體的企業(yè)。聯(lián)方的創(chuàng)始人在美國紐約留學(xué)，歸國創(chuàng)立了聯(lián)方。Kinetex液相色譜柱-HPLC和UHPLC的核-殼優(yōu)勢充分發(fā)揮UHPLC系統(tǒng)的性能與市面上傳統(tǒng)的亞2μm級(jí)色譜柱相比，Kinetex1。中西結(jié)合的管理理念，自強(qiáng)不息、開拓進(jìn)取、勤勉擔(dān)當(dāng)，致力于把聯(lián)方打造成一個(gè)百年品牌、一個(gè)z專業(yè)的一站式實(shí)驗(yàn)室采購平臺(tái)，追求質(zhì)量、追求服務(wù)、追求和創(chuàng)新?？茖W(xué)化、精細(xì)化、專業(yè)化。公司主營：Luna色譜柱，美國飛諾美色譜柱，Phenomenex色譜柱，手性色譜柱，Lux多糖類手性色譜柱等等

GeminipH 靈活性強(qiáng)的液相色譜柱

高 pH 下的極性堿（β 受體阻滯劑）

所有色譜柱的條件：

規(guī)格： 150 x 4.6mm

流動(dòng)相： A：10mM 碳酸氫銨 (pH 10.5)

B：yi腈

梯度： A/B 在 15 分鐘內(nèi)從 (85:15) 變成 (70:30)，

然后在 5 分鐘內(nèi)變成 (50:50)，保持 5 分鐘

流速： 1.5mL/min

溫度： 室溫

檢測： UV / 230 nm

樣品： 1. 比索洛爾污染物

2. 索他洛爾

3. 阿替洛爾

4. 拉貝洛爾（非對映異構(gòu)對）

5. 納多洛爾（非對映異構(gòu)對）

6. yi哚洛爾

7. 美托洛e(cuò)r

8. 比索洛爾

9. 普萘洛e(cuò)r

10. 阿普洛爾

手性色譜柱在手性技術(shù)中的應(yīng)用

手性化合物作為生命活動(dòng)的重要基礎(chǔ),在生體內(nèi)呈現(xiàn)出既有趣而又引人注目的生理機(jī)能。在yi藥,nong藥,香料及食品等領(lǐng)域中受到了廣泛的重視和大規(guī)模的研究開發(fā)。注意溫度和酸堿度一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱z高使用溫度不超過60℃,以低于40℃為宜,特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí),更應(yīng)降低使用溫度。在yi藥品當(dāng)中, 一方的手性異構(gòu)體呈現(xiàn)出有效的作用,而其另一方則往往不具,甚至具有毒性。類似此種現(xiàn)象已不為罕見。另外,在液晶領(lǐng)域中,利用手性化合物的排列特性的研究開發(fā)也已液相色譜法手性色譜柱分離3-羥基ding酸乙酯對映體

采用Chiralcel OD-H手性色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)作為分離柱,用液相色譜法對3-羥基ding酸乙酯對映體進(jìn)行了拆分。在優(yōu)化的色譜條件下,正己烷-異bing醇(100 5)溶液為流動(dòng)相,流量為1.0mL·min-1,柱溫為25℃。液相色譜柱使用問題解析如果柱子取下來放置一段時(shí)間，需要做什么保護(hù)嗎。3-羥基ding酸乙酯對映異構(gòu)體在11min內(nèi)成功分離,分離度達(dá)4.25。